| 目的： 研究重组腺相关病毒(rAAV)载体介导的增强型绿色荧光蛋白基因（GFP）对体外培养兔晶状体上皮细胞(LECs)的转染和表达，为rAAV携带目的基因防治后囊膜混浊提供理论依据。方法： 组织块培养法体外培养兔LECs，按感染复数（MOI）为10（3次幂）、10（4次幂）、10（5次幂）、4×10（5次幂）、10（6次幂）转染传三代细胞，转染后1、3、5、7、9、11天在倒置荧光显微镜下观察LECs中GFP表达阳性情况。记录200个细胞中GFP阳性表达所占的百分比。当GFP表达稳定后共聚焦显微镜照相。倒置显微镜观察rAAV转染对LECs生长和形态的影响。结果： MOI=10（3次幂）时，转染后72小时LECs中GFP开始表达，MOI=10（4次幂）、10（5次幂）、4×10（5次幂）、10（6次幂)时转染后24小时便可见GFP阳性表达。随着MOI值的增高及时间的延长，LECs中GFP的表达效率逐渐增高，同时，GFP的表达强度逐渐增强，转染后9-11天达到高峰，此时，MOI=10（3次幂）、10（4次幂）、10（5次幂）、4×10（5次幂）、10（6次幂）的转导效率分别为21%、41%、55%、86%、94% 。倒置显微镜观察对照组和转染组LECs的生长和形态特征无明显改变。结论： 腺相关病毒可以携带报告基因转染晶状体上皮细胞，并且转染效率高，腺相关病毒携带目的基因防治后囊膜混浊是可行的。 |
