| 〔摘要〕目的：检测人视网膜色素上皮（human retinal pigment epithelium，HRPE）细胞特异性及非特异性吞噬动力学，比较二者的不同之处。方法：用双重荧光标记法检测HRPE细胞吞噬动力学，即分别用红色染料硫氰酸罗达明（sulforhodamine,SR）、绿色荧光染料异硫氰酸酯荧光素(FITC)标记HRPE细胞和视杆细胞外节膜盘（rod outer segments，ROS）。用1×107 个/ml的FITC-ROS及自发绿色荧光的乳胶微球（leatex beads，LB）于37℃孵育培养的正常HRPE细胞，在孵育的不同时间（5min—48h）去除孵育物，终止吞噬反应。 用配有特殊三通广谱吸收波长,长工作距离镜头的荧光显微镜实时,活体观察并记录结合及吞噬的数量。用扫描电镜及激光共聚焦扫描显微镜证明HRPE细胞对LB及ROS结合与吞噬。结果：吞噬动力学结果显示，孵育15min时ROS已结合于HRPE细胞表面，30 min时可见极少数的ROS被HRPE细胞摄入细胞内；之后的孵育过程中被结合及被吞噬的ROS数目不断增加，至孵育18h对ROS的结合达到饱和，但摄入过程继续进行，至孵育24h，对ROS的吞噬达到饱和。当HRPE细胞与LB孵育时，至1.5h结合方启动，6h摄入开始；在观察的48h内被结合及被吞噬的LB数目随时间延长而呈线性增加。结论：HRPE细胞的特异性及非特异性吞噬动力学明显不同,HRPE细胞对ROS的结合及吞噬比其对LB的结合及吞噬发生得更早，而且结合及吞入过程均具有时间饱和性。采用双重荧光标记法对HRPE细胞的吞噬功能进行实时,活体观察结果更真实,可靠. |
