目的: 研究拉坦前列素酸对人Tenon囊成纤维细胞(HTF)促纤维化因子――结缔组织生长因子(CTGF)的影响,了解拟前列腺素类药物对青光眼手术滤过道瘢痕化的影响。
方法: 拉坦前列素酸作用于体外培养HTF的细胞。1. RT-PCR测定CTGF mRNA表达:①观察不同浓度拉坦前列素酸对HTF细胞CTGF mRNA表达的影响:实验分为6组(n=4),第1~5组分别以10-5~10-9M的拉坦前列素酸处理2天,第6组为对照组。②观察不同时间拉坦前列素酸作用对HTF细胞CTGF mRNA表达的影响,实验分为6组(n=4),第1、3、5组分别用10-7M拉坦前列素酸作用24、48、72小时;第2、4、6组为对照组,第24、48、72小时收集细胞。2. 免疫细胞荧光染色检测CTGF蛋白的表达: 实验分为6组,第1~5组分别以10-5、10-7、10-9、10-11、10-13 M的拉坦前列素酸处理2天,第6组为对照组。3. 采用FP受体抑制剂AL-8810观察CTGF mRNA和蛋白的上调能否被阻断,研究FP受体在拉坦前列素酸刺激HTF细胞CTGF表达中的作用。
结果: 1. CTGF mRNA表达:①10-9M~10-5M拉坦前列素酸作用2天,药物干预组CTGF mRNA表达增加187%~265%(p<0.05),不同浓度组之间无明显差别。②相对于对照组,10-7M拉坦前列素酸处理组CTGF mRNA第1天增加180±29%(P<0.01)、第2天增加166±25%(P<0.01)、第3天增加59±27%(P<0.01)。2. 拉坦前列素酸作用2天,免疫荧光染色分析CTGF蛋白表达:10-5M、10-7M、10-9M、10-11M浓度组分别上升207±56%(P<0.01)、107±38%(P<0.01)、53±32%(P<0.05)、87±53%(P<0.01),在10-5M、10-7M、10-9M浓度时存在量效关系(P<0.05)。3. AL-8810不影响CTGF mRNA和蛋白的基础表达,对拉坦前列素酸诱发的CTGF mRNA和蛋白的上调无抑制作用(P>0.05)。
结论: 拉坦前列素酸可上调HTF细胞致纤维化因子CTGF mRNA和蛋白的表达,该上调作用不是通过FP受体介导。
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