目的:研究底物谷氨酸对视网膜Müller细胞谷氨酸转运体GLAST的调控作用。
方法:(1)采用L-3H-谷氨酸摄取分析方法研究底物诱导对GLAST活性影响。并提取细胞总蛋白,采用Western blot方法分析视网膜Müller细胞GLAST蛋白质表达量的变化。(2)采用台盼蓝染色及血球计数板进行Müller细胞活细胞计数,分析100µM谷氨酸对视网膜Müller细胞存活的影响。然后采用CCK-8(Cell Count Kit 8)细胞毒性分析实验,通过测定450nm波长的吸光度值,观察不同浓度和不同时间内谷氨酸对Müller细胞存活的影响。
结果:(1)在培养的鼠视网膜Müller细胞中加入不同浓度的谷氨酸(5µM~1000µM)培养30分钟后,发现随着底物谷氨酸浓度增加,L-3H-谷氨酸的摄取量增加,当谷氨酸浓度为100µM时,L-3H-谷氨酸摄取量最大。随着谷氨酸浓度的增加,谷氨酸转运体GLAST蛋白质的表达量增加,当谷氨酸浓度为100µM时,GLAST蛋白质表达量达最大。(2)在含有和不含有100µM谷氨酸的无血清培养液中培养鼠视网膜Müller细胞10天,发现两组活细胞数比较差异无显著(P>0.05)。在培养的Müller细胞中加入不同浓度的谷氨酸培养4小时和18小时后,加入CCK-8培养4小时,发现不同时间、不同浓度的谷氨酸处理后的Müller细胞的吸光度值与对照组比较差异无显著性(p>0.05)。
结论:谷氨酸的底物诱导可增加GLAST摄取活性,且上调GLAST蛋白质的表达。谷氨酸对视网膜Müller细胞的存活无明显影响。
|