目的:体外培养牛视网膜血管内皮细胞(BREC),并观察肝细胞生长因子(HGF)对BREC的促增殖和移行效应。方法:将视网膜微血管消化分离后,采用含10%HS、100μg/ml肝素的DMEM培养BREC,通过第Ⅷ因子相关抗体(FⅧr-Ab)免疫组化方法检测细胞中FⅧr-Ag的存在来鉴定BREC;向BREC中分别加入5,25,50,100ng/ml的HGF,4d后用MTT法来测定细胞增殖情况;将已长满BREC的6孔培养板中的盖玻片取出,从而形成一方形无细胞区,加入5,25,50,100ng/ml的HGF继续培养,24h后计数进入空白区的细胞,判定HGF对BREC的促移行作用;流式细胞仪测其增殖周期 。各组数据以均数±标准差( ± s)表示,组间比较采用t检验。结果:HGF对BREC的促增殖作用成剂量-时间依赖关系。HGF浓度为5~100ng/ml,作用4d,能促进BREC的增殖,增率分别为8.5%,12.4%,33.8%,39.8%。 在HGF浓度为25ng/ml时,BREC在HGF作用后1~4d,增殖率分别为4.5%, 8.3%,10.4%(后两者P<0.05),15.6%(P<0.001)。 HGF对BREC促移行作用成剂量依赖关系,HGF浓度为5,25,50,100ng/ml时,24h后细胞的移行能力分别为10%,63%(P<0.05),239%,476%(后二者P<0.001)。流式细胞仪结果显示HGF促BREC增殖主要是作用于细胞周期的M期。结论:HGF可显著地促进BREC的增殖和移行,是细胞的有丝分裂原和强有力的促移行因子。
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