目的:探讨端粒酶反义寡核苷酸及其抑制剂对培养的视网膜色素上皮细胞增生的影响。
方法:用常规培养法培养人视网膜色素上皮细胞后,分别用端粒酶抑制剂二甲基亚砜,热休克蛋白90抑制剂,无血清培养,端粒酶反义寡核苷酸,P16反义寡核苷酸处理,然后提取细胞mRNA, PCR扩增后电泳检测端粒酶mRNA表达。然后用MTT法检测无血清培养组,端粒酶反义寡核苷酸处理组,P16反义寡核苷酸处理组与常规培养组细胞增生状况。
结果:DMSO组,热休克蛋白90抑制剂组,无血清培养组,端粒酶反义寡核苷酸处理组,端粒酶mRNA表达受到抑制,凝胶分析系统软件分析结果电泳H值分别为80,116,90,81,而P16反义寡核苷酸处理组端粒酶mRNA表达增强,电泳H值为255。而常规培养组H值为162,阴性对照组为0,阳性对照组(胃癌细胞)为255。 MTT法显示:无血清培养组,端粒酶反义寡核苷酸处理组细胞活性下降,细胞生长抑制率上升。而P16反义寡核苷酸处理组细胞活性上升,细胞生长抑制率下降。
结论:端粒酶抑制剂二甲基亚砜,热休克蛋白90抑制剂,无血清培养,端粒酶反义寡核苷酸可抑制RPE细胞端粒酶mRNA表达,从而抑制RPE细胞增生。而P16反义寡核苷酸可促进RPE细胞端粒酶mRNA表达,从而促进RPE细胞增生。
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