| 【摘要】 目的 研究累积性氧化损伤对培养的人视网膜色素上皮(human retinal pigment epithelium, hRPE)细胞生长的影响并探讨其机制。 方法 体外培养的hRPE细胞中加入600umol/L过氧化氢（Hydrogen peroxide，H2O2）分别培养1h、6h、12h、24h、72h，采用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测不同时段H2O2对hRPE细胞生长的影响，应用荧光素标记的连接素V/碘化丙锭(Annexin V- fluorescein isothiocyanate /Propidium iodium, Annexin V-FITC/PI)双染色流式细胞法测定hRPE细胞凋亡。采用半定量反转录聚合酶链反应（RT-PCR）法和蛋白印迹（Western-blot）法检测衰老相关蛋白clusterin在mRNA和蛋白水平的表达。 结果 1. MTT检测结果表明：600umol/L H2O2作用6h即可抑制hRPE细胞生长，随着H2O2作用时间的延长，其作用时间与hRPE细胞增长抑制率成正比。 2. Annexin V-FITC/PI法检测表明：600umol/L H2O2作用6h诱导hRPE细胞凋亡，且随时间的延长而增加，差异有显著性(P<0.05)，而72h后则引起细胞坏死为主的改变。3. RT-PCR法检测表明，H2O2作用12h时可见clusterin条带明显增强，24h组表达减弱，72h组仅见微弱表达。4. Western-blot法检测表明，clusterin蛋白在正常hRPE弱表达，H2O2作用12h时可见clusterin条带增强，24h组表达最强，72h组仅见微弱表达。结论 600umol/L H2O2长时间作用可抑制hRPE细胞生长，诱导hRPE细胞凋亡，同时诱导衰老相关基因clusterin的表达，而更长时间的累积损伤则造成hRPE细胞的坏死。H2O2氧化损伤可以模拟hRPE细胞的老年性改变。 |
