| 目的 研究体外培养的人角膜缘干细胞 ( Limbal stem cells,LSCs) 的生物学特性及羊膜为载体的人角膜缘干细胞移植在角膜缘干细胞缺陷大鼠眼表重建中的作用，探讨角膜缘干细胞的临床应用价值、方法及前景。
方法 体外培养人角膜缘干细胞，采用免疫荧光染色法及RT-PCR法分析p63，K19，K3/K12 等标志物在细胞中的表达，以BrdU掺入法 (BrdU labeling test) 分析细胞的增殖特性；以碱烧伤法建立大鼠角膜缘干细胞缺陷模型并随机分组，分别对各组大鼠患眼进行羊膜为载体的角膜缘干细胞移植术、单纯羊膜移植术以及单纯抗炎药物治疗，治疗后通过裂隙灯观察﹑角膜组织切片HE染色以及免疫荧光染色等方法进行评价。
结果 ①人角膜缘细胞在体外可以增殖分化并呈复层生长。免疫荧光染色表明于培养早期大多数细胞表达K19及p63，仅少数细胞表达K3；随着培养时间的延长，p63和K19阳性表达细胞比例略有降低，在部分细胞荧光表达强度也有所降低，K3阳性细胞增多，部分细胞同时表达p63及K3，部分细胞仅表达K3或p63。RT-PCR示培养的角膜缘细胞中p63及K12均为阳性表达，而角膜成熟上皮细胞仅表达K12。BrdU掺入实验示角膜缘细胞于含BrdU培养液中培养7天后，多数细胞BrdU免疫荧光染色标记阳性，无BrdU培养21天后仍可观察到BrdU标记保持细胞，此即slow-cycling细胞。培养于羊膜上的角膜缘细胞具有上述相似的生物学特性。②动物实验结果示：眼表评分统计学分析及角膜切片HE染色表明，以羊膜为载体的角膜缘干细胞移植可以重建大鼠眼表，疗效明显优于单纯羊膜移植及单纯药物治疗。干细胞移植组大鼠角膜组织切片免疫荧光染色示大部分上皮细胞抗人核染色阳性，K3染色阳性细胞主要分布于表浅层上皮。
结论 角膜缘干细胞可以在体外培养扩增，有向成熟角膜上皮细胞分化的潜能, 具有增殖周期长、增殖能力强、有丝分裂活性低等生物学特性。以羊膜为载体的人角膜缘干细胞移植可以重建角膜缘干细胞缺陷大鼠的角膜上皮。体外培养的角膜缘干细胞移植特别是异体移植具有较高的临床应用价值及广阔的发展前景。
|
