| 目的 研究IL-1ra基因治疗和预防角膜移植排斥反应的效果，并探讨其免疫学抑制机制。方法 建立Wistar-SD大鼠角膜移植排斥模型，将试验动物分为4组。I组为阴性对照，II组为IL-1ra基因角膜注射组（供体植片移植前进行转染），III组为IL-1ra基因前房注射组（重建前房时转染），IV组为IL-1ra结膜下注射。对各组大鼠角膜植片存活情况进行评分比较。通过免疫组化技术和ELISA检测各组大鼠在角膜移植排斥反应前、急性排斥反应期及排斥反应后2周，角膜植片中转化生长因子β1(Transforming growth factor, TGF β1)、ICAM-1、RANTES、CD4、CD8的表达情况及IL-1α、IL-1β的含量。通过RT-PCR和Western-blotting检测上述时间点基因治疗组中IL-1ra蛋白和IL-1ra mRNA在角膜中的表达水平。结果 1. IL-1ra基因治疗组和IL-1ra蛋白注射组的角膜植片存活时间(天)分别为12.56±1.31、12.21±1.14、11.692.37与对照组7.65±0.88相比，差异有显著性(P<0.05)。治疗组排斥反应指数(Rejection index，RI)均明显低于对照组(P<0.05)， II、III、IV组之间差异无显著性（P>0.05）。2. 观察期各时间点II、III、IV组的CD4、CD8阳性细胞计数少于I组(P<0.05)。在排斥后期II、III阳性细胞数量高于IV组(P<0.05)。3. 各组角膜植片在排斥反应发生后TGF β1、RANTES、ICAM-1的表达水平均明显增高，但治疗组的表达强度低于对照组。4. 急性排斥期II、III、IV组植片的IL-1α、β检测浓度低于I组(P<0.05)，治疗组之间无差异。排斥反应后2周，II、III组的含量高于IV组有差异(P<0.05)，但仍低于I组(P<0.01)。 5. IL-1ra基因角膜注射和前房注射后在植片有IL-1ra蛋白和IL-1ra mRNA表达。在急性排斥前和急性排斥期维持较高水平的表达。结论 阳离子聚合物介导下移植前对供体角膜预转染和移植后前房注射可将IL-1ra基因导入植片组织，并且获得IL-1ra蛋白的高效表达。通过多种信号通路下调免疫分子的表达水平，减轻免疫细胞的浸润，进而抑制免疫排斥反应，延长异体角膜植片的透明时间。IL-1ra基因治疗可望在角膜移植免疫排斥的防治中发挥重要的作用。 |
