| 目的 研究角膜基质注射和前房注射阳离子聚合体（线性聚乙烯亚胺Poly-ethylenimine，PEI）/IL-1ra质粒复合物，转染角膜组织的有效性和安全性。 方法 表达IL-1ra-GFP蛋白的重组质粒PEGFP-C2 -hIL-1ra和阳离子聚合体的混合溶液，分别注射Wistar大鼠角膜基质和前房(n=26，I，II组)，空载体组（n=10，III组）注射PEI/PEGFP-C2溶液，对照组（n=10，IV组）注射等量5%GS。不同时间点（1、3、6、14、21天）收集角膜通过HE染色、透射和扫描电镜、台盼蓝－茜素红染色、AE5和P63免疫组化观察IL-1ra基因原位转染后的组织结构变化。荧光显微镜下追踪IL-1ra-GFP融合蛋白在眼内的表达部位和表达强度。RT-PCR和Western-Blotting技术检测不同时间点角膜、虹膜、视网膜的IL-1ra基因和蛋白表达水平。 结果 1. HE染色显示各组均未见明显的组织结构病理性改变。2. 基质注射组角膜上皮层AE5染色阳性，部分基底细胞P63阳性，与对照组角膜细胞表达标记部位一致。3. 透射电镜证实质粒注射组角膜各层细胞的细胞浆内可见IL-1ra－GFP颗粒，未见细胞器的损害。4. 扫描电镜见质粒注射组的角膜上皮、内皮细胞连接紧密，细胞膜完整，角膜基质纤维排列整齐。5. 实验组经茜素红-台盼蓝联合染色未见CE损害性改变。6. I组角膜上皮层注射1天可见荧光表达，6天时全角膜荧光强度达到高峰，14天开始减弱，21天只有角膜上皮层尚存微弱荧光。II组荧光持续时间同I组，其角膜为中等强度荧光，视网膜亦有一定荧光表达。IV组观察期内始终未见绿色荧光。7. I组和II组1天时角膜均可见IL-1ra蛋白表达，相对分子量为44KD，6天时达到峰值，I组在6天的IL-1ra表达水平高于II组， III组未见蛋白表达。 8. RT-PCR结果显示IL-1ra mRNA在I组和II组角膜中均有表达，I组角膜在早期的IL-1ra mRNA含量高于II组，但II组的虹膜表达强度要高于I组。此外I组的视网膜未能检出IL-1ra mRNA片断。 结论 IL-1ra基因基质注射后在角膜的表达峰值高于前房注射，但前房注射对眼内组织的转染效果优于前者，提示可根据所要导入基因的靶组织选用不同的转染途径。阳离子聚合体介导下角膜基质注射和前房注射基因技术可快速的将外源性基因转入角膜并获得表达，且转染效率较高，安全性好。为临床上使用抗炎细胞因子IL-1ra对角膜免疫炎症相关性疾病进行治疗提供了新的基因治疗技术平台。 |
