| 摘要 目的 运用多重巢式PCR技术，同步检测人组织中的HBV和HCV，为角膜移植供体组织材料中HBV和HCV的快速筛查建立方法。方法 参照相关文献和GenBank公布的HBV和HCV全基因序列，分别设计HBV和HCV的半巢式和巢式引物，由上海生共生物工程公司合成。供体角膜周边组织材料32份，由本所眼库提供。角膜供体年龄为18～45岁之间。以上角膜材料均由全省各地、市级医院送来，供体人员生前是否患有HBV和/或HCV均情况不明。 在得到角膜周边组织材料后，每份标本迅速切取10mg左右置于无菌研磨器内研磨，用一步法快速提取基因组DNA和总RNA试剂盒（维特洁生化技术有限公司产品）分别提取DNA和总RNA。首先完成HCV的反转录cDNA,然后在同一反应体系内同时加入HBV和HCV的两对引物，采用“双温”，35循环法，进行两轮巢式扩增。 结果 在32份样本中，HBV阳性为3份（阳性率9.3%）；HCV均为阴性（阳性率0%）。结论 从角膜周边组织中提取基因并用于HBV和HCV的组织快检，可扩大用于角膜移植材料的来源。运用多重巢式PCR技术对角膜供体材料中DNA和RNA的组织快检，具有方法简便、灵敏度高、出结果快、经济等优点，具有推广应用价值。 |
