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目的：由短发夹RNA（ shRNA）介导的RNA干扰技术对能有效的特异性导致哺乳动物基因沉默。本研究目的证明针对人血管内皮生长因子（VEGF）的设计的短发夹RNA体外抑制视网膜色素上皮（RPE）细胞VEGF的表达。方法：用酶辅助显微分离法分离人RPE细胞，并用细胞角蛋白和S-100进行免疫组化鉴定。设计针对人VEGF的短发夹RNA（shRNAs，V1,V2）， V3为阴性对照即不含特异性shRNA，其表达载体为pSilencer 4.1-CMV。提取的质粒用EcoRI 和 SamI进行酶切鉴定。实验分四组， 2、3、4组：分别用V3、V1、V2转染RPE细胞24小时后在含有100μM CoCl2 的10%FBS的DMEM培养基中培养30小时；第1组：不进行转染，只在RPE细胞中加100μM CoCl2含有10%FBS的DMEM培养基中培养30小时；用Western blot方法检测各组细胞VEGF表达水平。结果：培养的细胞用细胞角蛋白和S-100免疫组化染色阳性。提取的质粒经酶切后片断大小分别为3.3kb 和1.6kb，说明质粒成功地提取和纯化。VEGF表达水平组3明显低于组1、组2、组4。结论：针对人VEGF的特异性shRNA可以明显降低人RPE细胞VEGF的表达，为RNA干扰治疗新生血管性眼病，尤其是脉络膜新生血管奠定了基础。
关键词：RNA interference（RNAi）,血管内皮生长因子（VEGF），视网膜色素上皮细胞（RPE），氯化钴（CoCl2）
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