目的:分别构建野生型和突变型睫状神经营养因子(CNTF)基因的真核表达载体,检测它们的体外表达情况。方法:通过RT-PCR扩增小鼠CNTF的全长编码序列,连接入T载体,体外定点突变获取突变型CNTF的cDNA编码序列,经限制性内切酶双酶切后,将野生型和突变型CNTF基因连入pTracer真核表达载体,转染人视网膜色素上皮细胞,ELISA检测野生型和突变型CNTF的蛋白表达。结果:成功构建了野生型和突变型CNTF基因的真核表达载体,并且在体外表达了其相应的蛋白质。结论:野生型和突变型CNTF基因真核表达载体的构建,将神经营养因子与基因工程手段结合起来,为视网膜色素变性的分子治疗提供思路。 |