| 目的 建立快速筛查LHON患者线粒体DNA3个原发性致病突变位点的全血样等位基因特异性多重PCR体系。方法 根据95％的LHON患者属于三个原发性致病突变位点（G11778A，G3460A和T14484C），设计和合成三对位点特异性PCR引物，直接以全血样做PCR的DNA模板，通过优化等位基因特异性多重PCR体系，单管一次性PCR反应，可同时检测LHON患者的线粒体DNA3个原发性致病突变位点。检测24份LHON阳性患者（其中18例G1778A，4例T14484C和2例G3460A）和50例正常对照血样标本。结果 采用优化的等位基因特异性多重PCR体系，检测的24份LHON阳性患者和50例正常对照组血样标本结果表明该方法的准确率为100％；该方法体系还可直接利用含血样的纱布或滤纸作PCR的DNA模板；另外，由于没有同时含二个或三个原发性LHON致病性突变位点的患者血样标本，我们采用人为混合血样检测该方法体系的可靠性，结果表明，该方法对有些混合样能有效诊断，对有些混合血样只能检测到部分突变位点，原因可能与不同血样混合增加了抑制PCR反应等有关。结论 该方法具有简便快速、高效、费用低、特异性好、只需微量血液样本等优点，为LHON患者提供一种快速、简易的临床基因诊断，具有普及推广应用价值。 |
