| 目的:1、建立人胚胎视网膜干细胞的体外培养方法。2、探讨视黄酸对体外培养的人胚胎视网膜干细胞的诱导分化作用。
方法：1、从胎龄8～12周人胚胎视网膜神经上皮分离视网膜细胞，分别用两种培养体系：悬浮培养体系（普通塑料培养皿）和贴壁培养体系（预先用多聚鸟氨酸+层粘连蛋白包被过的培养皿）培养，进行形态学观察及免疫细胞化学法鉴定。2、将培养的细胞分为三组，分别置于含1％胎牛血清（对照组）、含5％胎牛血清（5％血清组）和含500nM视黄酸＋1％胎牛血清（视黄酸组）的培养基中诱导分化。观察细胞形态变化，采用免疫细胞化学法检测神经干细胞标记物Nestin、神经胶质细胞标记物GFAP、神经元标记物ß－Tubulin、光感受器细胞标记物Recoverin和视杆细胞标记物Rhodopsin的表达，分别比较三组间各种标记物表达的阳性率。
结果：1、悬浮培养体系中，细胞形成神经球表达神经干细胞的标记物Nestin，但无法成功传代扩增；贴壁培养的细胞可连续传代并表达Nestin。2、在三种分化培养基中，人胚胎视网膜干细胞被诱导分化后，细胞表达不同比例的GFAP、ß－Tubulin和Recoverin。其中视黄酸组，分化的细胞除了表达上述三种标记物外，还表达Rhodopsin。与其他两组相比，视黄酸组细胞表达ß－Tubulin和Recoverin的阳性率最高，而GFAP的阳性率最低。
结论：1．本实验建立了人胚胎视网膜干细胞的体外培养方法。从8～12周的人胚胎视网膜神经上皮分离培养的细胞具有体外扩增和多分化潜能。2．作为诱导剂，500nM 视黄酸比5％胎牛血清更有效地诱导视网膜干细胞向神经元及光感受器细胞方向分化。
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