目的:检测正常人、原发性开角型青光眼(POAG)、皮质类固醇性青光眼(GIG)患者外周血红细胞胞膜上水通道蛋白-1(aquaporin-1, AQP1)的表达水平,研究AQP1在开角型青光眼发病中的作用,寻找开角型青光眼诊断和鉴别诊断的实验室依据。
方法:红细胞膜的提取:取年龄、性别相匹配的正常人、POAG、GIG各10例,每例抽取外周血8~10ml,红细胞计数,各取3200万红细胞,低温离心、洗涤,得压积红细胞,按1:10加低渗缓冲液,溶血、离心制备红细胞影膜。免疫印迹:红细胞影膜加入1:1的蛋白质样品处理液,超声水浴15分钟,煮沸5分钟,低温保存;按Western-blot试剂盒推荐的方法,Ⅰ抗为1:500兔抗人AQP1多克隆抗体,Ⅱ抗由试剂盒提供,先行SDS-PAGE电泳,再行蛋白质的转移、封膜、抗体结合反应、曝光、摄影、全自动影像分析等过程,三组数据作均数比较。
结果:AQP1免疫印迹阳性带的分子量约为28kD,图像扫描测出特异性条带的平均光密度值和条带面积,计算整体光密度值,分别为正常人组:361.37±61.45,POAG组:324.26±74.12, GIG组353.74±69.78,经统计学分析,差异无显著性(均数t检验,p>0.05)。
结论:正常人、POAG、GIG患者外周血红细胞胞膜上AQP1的表达水平没有明显差异,AQP1在小梁网细胞上是否存在表达差异及在开角型青光眼发病中是否发挥作用尚待进一步研究,外周血红细胞膜上AQP1检测仍不能成为开角型青光眼的诊断指标。
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