| 目的：通过与细胞培养池相比较，探讨应用Minucell & Minutissue灌注培养系统构建组织工程化板层生物角膜的可行性。
方法：以组织块培养法扩增的兔角膜缘干细胞为种子细胞，以高分子材料聚对苯二甲酸乙二醇酯（polyethylene terephthalate，PET）为载体，利用灌注培养系统、细胞培养池体外构建板层生物角膜，pH计测定两种培养系统培养液pH值的变化，并通过HE染色、Hoechst 33342、Propidium iodide荧光染色、扫描电镜、透射电镜等观察所构建组织的细胞排列方式与形态结构；免疫组化、RT-PCR检测所构建组织的p63及K3/K12表达；比较两种构建方法的条件稳定性及所构建组织的差别。
结果：细胞培养池培养液的pH值存在较大波动，而灌注培养系统pH值变化范围比传统的方法pH值波动范围小。HE染色、Hoechst 33342、Propidium Iodide荧光染色以及透射电镜显示灌注培养系统比细胞培养池所构建的组织细胞排列更加紧密。免疫组化、RT-PCR检测到所构建组织的K3/K12表达阳性，免疫组化检测到所构建组织的p63阴性。
结论：细胞培养池、灌注培养系统两种方法均可构建出健康的复层角膜上皮组织，构建组织K3/K12的mRNA、蛋白质表达差别不大，但是细胞排列方式，细胞与载体结合的紧密程度存在明显差别。
本课题受国家高技术研究发展计划（2003AA205050）、 国家“十五”科技攻关计划(2004BA720A15)基金资助。
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