| 目的: 探讨应用旋转培养法构建组织工程化生物角膜的可行性。
方法: 以组织块培养法扩增的角膜缘干细胞为种子细胞，以高分子材料聚对苯二甲酸乙二醇酯（polyethylene terephthalate，PET）为载体，用旋转培养系统体外构建板层生物角膜组织，通过HE染色、Hoechst 33342、Propidium iodide荧光染色、扫描电镜、透射电镜等观察所构建组织的细胞排列方式与形态结构；免疫组化、RT-PCR检测所构建组织的p63及K3/K12表达。
结果: 培养2周后HE染色、Hoechst 33342、Propidium Iodide荧光染色共聚焦显微镜下可见细胞形成3～5层的复层结构，细胞之间镶嵌排列：底层细胞呈现立方状，表层细胞呈现扁平外观，中间细胞呈翼状，接近正常兔的角膜上皮层的排列方式。免疫组化、RT-PCR检测到所构建组织的K3/K12表达阳性，免疫组化检测到所构建组织的p63阴性。扫描电镜下，表层细胞微绒毛清晰，类似正常角膜上皮微绒毛，平均细胞面积比正常角膜上皮细胞小。透射电镜下可见细胞之间存在桥粒结构，各层细胞之间连接存在细小空隙。
结论：旋转培养系统可构建出健康的复层角膜上皮组织，构建组织有K3/K12的mRNA、蛋白质表达，但是细胞排列方式与正常组织相比存在差别。
本课题受国家高技术研究发展计划（2003AA205050）、国家“十五”科技攻关计划(2004BA720A15)基金资助。
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