目的: 建立正常人眼小梁组织蛋白质的二维凝胶图谱;建立正常人眼小梁组织的“全部”蛋白表达谱,对维持小梁正常功能的蛋白分类,并为研究青光眼小梁蛋白质组改变打下基础。
方法:1) 对正常人眼小梁组织及蛋白质样品进行二维凝胶电泳及凝胶图像扫描分析,建立谱图库;
2) 选择明显的蛋白点进行基质辅助激光解析电离-飞行时间质谱分析(MALDI-TOF-MS),以所得肽质量指纹图谱鉴定凝胶上的蛋白质斑点,并将MALDI-TOF鉴定出来的蛋白点,用MASCOT搜索工具和PROFOUND肽段搜索工具相互补充搜索进行鉴定,获得与凝胶图谱对应的正常人小梁网蛋白质组数据。
结果:1)成功建立对小梁组织进行样品处理及双向凝胶电泳的条件和方法,获得正常人眼小梁组织不同大小二维凝胶电泳蛋白谱图;
2)在18×16cm2凝胶上选取448个蛋白点进行MALDI-TOF-MS分析,共鉴定出216个蛋白点。
3)对所鉴定的蛋白进行初步功能分类,主要包括几类:代谢相关蛋白、骨架蛋白的和细胞外基质蛋白、细胞周期、转录调控、信号转导相关蛋白、细胞因子和相当一部分未能命名的蛋白或是一些假定蛋白。
4)高丰度表达蛋白主要有代谢相关蛋白、骨架蛋白、基质蛋白、。
5)在正常人眼小梁组织中鉴定出myocilin/TIGR蛋白、Rho GDP分化抑制因子、转化生长因子β以及钙离子相关蛋白annexinⅤ等与POAG发病机制相关的蛋白质。
结论:建立的正常小梁组织蛋白质图谱和蛋白质功能分类能为我们提供小梁组织中不同蛋白质组成成分及含量的信息,为进一步了解病理状态下小梁组织的差异蛋白表达水平的变化和发现特异蛋白,研究POAG的发病机制提供依据。
|