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实时荧光定量RT-PCR检测HLE-B3细胞膜上Ca2+-ATPase mRNA的表达
作者:王晓黎 杨…  文章来源:中山大学中山眼科中心  点击数1775  更新时间:2005/6/20 22:59:21  文章录入:wxl0315  责任编辑:毛进
目的:检测不同浓度不同作用时间的Thapsigargin(TG)对HLE-B3细胞膜上Ca2+-ATPase同工异构体PMCA1表达的调控。方法:培养的HLE-B3细胞达到90%融合后,用浓度为0、0.01μM、0.1μM、1μM和10μM的Thapsigargin分别处理4、12、16、24小时,然后分别抽取总RNA,用实时荧光定量RT-PCR(real time RT-PCR)的方法对细胞膜上Ca2+-ATPase同工异构体PMCA1表达的进行定量检测。结果:HLE-B3细胞0、0.01μM、0.1μM、1μM和10μM的处理4、12、16、24小时后,发现在TG低浓度时(0、0.01μM、0.1μM),随着TG浓度的升高,PMCA1 mRNA的表达随之升高;而当TG浓度过高时(≥1μM),PMCA1 mRNA的表达反而下降。结论:在TG低浓度时(≤0.1μM),随着TG浓度的升高, PMCA1 mRNA的表达随之升高;而当TG浓度过高时(≥1μM), PMCA1 mRNA的表达反而下降。
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