1. 目的
定位检测Nogo-AmRNA在成年大鼠正常和视神经损伤和再生后视网膜中的表达和分布,探讨Nogo-A与视神经损伤和再生的关系,从mRNA水平探讨Nogo-A在视神经再生中的作用。
2. 方法
2.1 成年雄性Wistar大鼠200-230g共90只。将其中45只成年大鼠随机分为3组,每组15只大鼠,右眼为正常对照组,左眼为单纯夹伤组,在眼球后2mm用视神经损伤夹夹持9s,按损伤时间不同,分为Ⅰ组(夹伤后1天)、Ⅱ组(夹伤后3天)、Ⅲ组(夹伤后7天);将另45只成年大鼠随机分为3组,每组15只大鼠,右眼为夹伤后注射酵母多糖组,分为Ⅳa组(夹伤后1天)、Ⅴa组(夹伤后3天)、Ⅵa组(夹伤后7天);左眼为对照组,为夹伤后注射PBS组,分为Ⅳb组(夹伤后1天)、Ⅴb组(夹伤后3天)、Ⅵb组(夹伤后7天)。
2.2 沿眼球视神经长轴制作视网膜和视神经冰冻切片。
2.3 应用原位杂交方法检测视网膜和视神经中Nogo-AmRNA的表达和定位。将切片图象输入图象分析仪进行处理。
3. 结果
3.1 视网膜中可见Nogo-A mRNA在不同细胞层中的表达:视网膜神经节细胞层、内颗粒层、外颗粒层中可见Nogo-A mRNA表达,其中以视网膜神经节细胞层为最多。
损伤后1至3天视网膜和视神经内Nogo-AmRNA阳性细胞染色面积和吸光度(A)值逐渐升高,3至7天逐渐下降,均比正常对照组表达增加(P<0.01)。
Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组分别与对照组比较,阳性细胞染色面积差异有极显著意义(t=3.82,4.21,4.07;P<0.01),A值差异有非常显著意义(t=3.90,4.52,3.78; P<0.01),表明视神经夹伤后视网膜和视神经中Nogo-AmRNA表达增加。
3.2 夹伤后注射酵母多糖组及PBS组伤后1至3天视网膜内Nogo-AmRNA表达水平逐渐升高,3至7天呈下降趋势。
Ⅳa组、Ⅴa组、Ⅵa组分别与Ⅳb组与Ⅴb组、Ⅵb组比较,阳性细胞染色面积差异有极显著意义(t=3.58,4.93,3.72;P<0.01),A值差异有非常显著意义(t=4.85,4.19,4.81;P<0.01 ),表明夹伤后注射酵母多糖组视网膜内Nogo-AmRNA表达水平低于注射PBS组。
4. 结论
4.1 Nogo-A mRNA在视神经损伤后视网膜和视神经中的表达明显增多;
4.2 在活化巨噬细胞促进视神经损伤后轴突再生后Nogo-A mRNA在视网膜和视神经中表达明显减少;
4.3 Nogo-A在抑制视神经损伤后轴突再生的机制中可能起重要作用。
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