目的:观察TNP-470对人脐静脉内皮细胞系ECV-304细胞生长的影响;方法:采用MTT、细胞生长曲线、倒置显微镜形态学观察、荧光染色、流式细胞术等方法观察不同浓度TNP-470对ECV-304细胞形态、细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响;结果:(1)MTT结果显示:在低浓度(0.2ng/ml)时,TNP-470对ECV-304增殖无明显抑制作用,从2ng/ml浓度开始产生抑制作用,且该抑制作用具有量效关系,IC50值为305ng/ml;(2)生长曲线:20、200、2000ng/ml浓度的TNP-470处理细胞后,细胞增殖被抑制,且具有剂量-时相依赖性;(3)倒置相差显微镜下观察:各时间段对照组细胞生长状态正常,排列整齐呈铺路石样;从2ng/ml浓度开始出现细胞增殖抑制现象,随作用时间的延长和浓度增高抑制作用更为明显;2000ng/ml组见少部分脱落、悬浮细胞;(4)荧光染色见各组细胞大多数为正常结构活细胞,染色主要着亮绿色;2000ng/ml组可见少量坏死细胞,被染成橘红色;各组均有极少量的凋亡细胞,但凋亡细胞指数无明显差异(P>0.05);(5)流式细胞仪分析结果:经20、200、2000ng/ml的TNP-470作用24、36小时后,细胞被阻滞在G0/G1期,G2/M、S期的细胞数减少(P<0.05),细胞分裂受抑制,增殖指数降低。各组细胞的凋亡峰值均无显著差异(P>0.05);结论:一定浓度的TNP-470能使ECV-304细胞周期阻滞在G0/G1期,对细胞的增殖具有抑制作用;TNP-470不能诱导ECV-304细胞凋亡。
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