目的 探讨腺伴随病毒载体介导人K5基因能否治疗SD大鼠ROP视网膜新生血管,为治疗早产儿视网膜新生血管提供新的治疗方法。
方法:将目的基因血管抑素k5亚克隆至腺伴随病毒载体pSNAV 形成pSNAVK5并进行基因测序;目的基因K5蛋白表达,Westblot;腺伴随病毒载体包装,纯度及滴度检测;SD大鼠ROP模型形成。取SD大鼠ROP模型鼠18只,随机选择一眼作为实验组球玻璃体腔注射rAAVk510ul另只眼球作为对照组注射rAAVLacZ10ul进行阴性对照,分别对实验组和对照组视网膜血管进行血管内皮VIII因子染色。
结果 :pSNAVK5构建正确,经过基因测序及阅读框校读证实为血管抑素K5基因;根据蛋白表达及Westblot证实产物为目的基因K5所表达,经过滴度及纯度检测所包装的腺伴随病毒滴度为:2.5X1012gv/ml;实验组和对照组视网膜血管内皮细胞VIII因子相关抗原染色显示:在玻璃体腔及视网膜有大量表达:实验组细胞核记数19.9542±3.8257,阴性对照组细胞核记数7.3352±2.7313,两组之间比较P值〈0.01。空白对照组细胞核数0.4200±0.6091
实验组和对照组t`检验(P〈0.01有显著性差异。
结论:腺伴随病毒载体介导人血管抑素K5基因可用来治疗SD大鼠ROP视网膜新生血管,它可能成为治疗早产儿视网膜新生血管新的疗法。
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