目的 观察高糖对视网膜色素上皮屏障功能的影响
方法 采用ARPE-19细胞系,培养在Millicell-HA杯状培养皿中,建立视网膜外屏障模型,用含不同糖浓度的DMEM/F12培养基培养ARPE-19细胞,在不同时间点测量ARPE-19的跨上皮电阻(TER)与对辣根过氧化物酶(HRP)的通透性;RT-PCR与Western-blot 检测在不同培养基中生长的ARPE-19细胞紧密连接相关因子occludin、ZO-1、claudin-1的基因和/或蛋白表达情况
结果 在高糖(30mmol/L)环境中生长的ARPE-19细胞TER波动较大,第1、2周时与对照组(7mmol/L)相比TER增高,差异有极显著性(P<0.001);3周时差异减小,但仍有显著性(P=0.013),4周时差异无显著性(P=0.101);对HRP的通透性则始终具有显著性差异,P<0.05;高糖环境中ARPE-19的occludin、ZO-1、claudin-1的mRNA表达虽然变化幅度不同,但均呈“先高后低”趋势,蛋白表达与基因表达水平变化一致。结论:高糖影响视网膜色素上皮屏障功能,改变细胞间离子流动与化学物质弥散情况,但两者变化幅度不全相同;高糖影响视网膜色素上皮紧密连接相关因子的表达,并且随时间延长表达水平的改变不同。
|