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乳铁蛋白双抗夹心ELISA的建立及检测对于干眼诊断价值的研究
作者:虞东芳1 …  文章来源:中山大学中山眼科中心 广州 510060  点击数1477  更新时间:2005/6/30 11:06:23  文章录入:aya610  责任编辑:毛进
目的 建立针对乳铁蛋白的ELISA检测方法检测泪液乳铁蛋白含量,评价其对于干眼的诊断价值。方法 以乳铁蛋白为固相抗原,运用噬菌体抗体库技术制备抗乳铁蛋白单链抗体,作为包被抗体。并制备兔抗乳铁蛋白多克隆抗体,进行辣根过氧化物酶标记作为酶标抗体,由此建立乳铁蛋白的双抗夹心ELISA,并对其进行实验室评价。选取30例干眼患者及31例正常对照,毛细玻管法分别取其基础泪液和反射泪液,以上述建立的方法检测泪液乳铁蛋白含量,统计学方法分析检测结果。结果 建立的方法学具有良好的稳定性,特异性和敏感性,乳铁蛋白标准品浓度与OD值之间的变化经曲线拟和符合对数方程,线性关系良好。检测结果示30例干眼患者和30例正常人反射泪液乳铁蛋白含量分别为1.10±0.22和1.30±0.27mg/ml,有显著性差异,干眼患者反射泪液乳铁蛋白含量较低,以1.20mg/ml作为诊断干眼的截断值,敏感性达74.2%,特异性达69.5%。其中23例干眼患者及27例正常人取两种性质泪液,干眼患者反射泪液和基础泪液乳铁蛋白含量为1.10±0.28和0.95±0.16mg/ml,正常人则为1.33±0.28和0.94±0.22mg/ml。干眼患者和正常人两种泪液乳铁蛋白含量差异均有显著性,反射泪液乳铁蛋白含量较高。干眼患者和正常人两种泪液乳铁蛋白含量比值分别为1.16±0.19,1.46±0.35,两者有显著性差异,以1.25作为诊断干眼的截断值,敏感性达82.6%,特异性达74.1%。 结论 检测泪液乳铁蛋白含量对于干眼有一定的诊断价值。比较不同性质的泪液的检测结果,示反射泪液乳铁蛋白含量及反射泪液与基础泪液乳铁蛋白含量的比值对于干眼的诊断价值更高。有望通过更大样本量的研究后制定统一的标准,广泛用于今后临床干眼的诊断。
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