目的:研究靶向IκB激酶β(Iinhibitor of kappa B kinase β, IKK-β)的小干扰RNA(small interference RNA, siRNA)能否抑制体外培养的人Tenon’s 囊成纤维细胞增殖的可行性和效果。
方法:设计针对人IKK-β的特异的siRNA,并将其转染入体外培养的人Tenon’s囊成纤维细胞。转染后24小时后分别使用RT-PCR、real-time PCR检测IKK-β的mRNA表达水平,转染后72小时后用western-blot的方法检测其蛋白质表达水平。使用划痕法检测RNA干扰后成纤维细胞的迁移能力改变,MTT法测定RNA干扰后细胞的抑制率。
结果:RT-PCR、real-time PCR显示在转染后24小时后,IKK-β的mRNA表达水平明显降低。western-blot也显示IKK-β在转染后蛋白质水平表达下降。MTT法显示转染后体外培养的Tenon’s囊成纤维细胞活性明显受到抑制(P<0.05),当siRNA的转染浓度为50nM时,抑制率达50%。同时转染后细胞的迁移能力也下降。
结论:特异的siRNA可以干扰IKK-β的转录和翻译,抑制体外培养的Tenon’s囊成纤维细胞的增殖。
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