| 目的：视网膜色素上皮（RPE）细胞在眼的代谢中起重要作用。结缔组织生长因子（connective tissue growth factor, CTGF）具有广泛的生物学作用，参与机体许多正常和病理状态下的功能活动。本实验观察RPE细胞在重组人CTGF因子(rhCTGF)刺激时Ca2+信号变化情况，研究rhCTGF对RPE细胞内钙信号传导的作用；同时观察了8-溴-cAMP(8-Br-cAMP)或地塞米松(DEX)对rhCTGF诱导的Ca2+信号变化的影响。方法：选用易透过细胞膜的荧光染料fluo-3/AM负载RPE细胞，用激光扫描共聚焦显微镜（LSCM）动态扫描各种刺激条件下RPE细胞内荧光强度变化；每份样品取3个左右相连的细胞对荧光强度进行半定量分析,从而测定rhCTGF及联合应用8-Br-cAMP或 DEX 对细胞内游离Ca2+浓度（[Ca2+]i）的影响。结果：不同浓度rhCTGF的刺激可导致RPE细胞荧光强度急剧升高，持续约40―60秒即迅速恢复到基线水平。对荧光强度进行半定量分析，显示CTGF可以剂量依赖性刺激RPE细胞内游离Ca2＋浓度的升高，最大剂量为100ng/ml。20nM EGTA预处理RPE细胞30min造成细胞外液无钙环境后, rhCTGF(100ng/mL)刺激细胞，[Ca2+]i仅能轻度升高，进一步再加入12.5mM Cacl2 至无钙环境中，可见rhCTGF诱导一个非常明显和持久的[Ca2+]i升高，高峰值出现在刺激90sec后,持续时间约3min。DEX(10ug/mL)或8-Br-cAMP(10-4M)分别和rhCTGF一同处理细胞，可以明显抑制CTGF诱导的[Ca2+]i的升高，抑制率分别为51.06% 和50.02%。结论：CTGF可以刺激RPE细胞内Ca2+信号传导通路，CTGF诱导的细胞内游离Ca2+ 浓度的升高涉及两种机制：细胞内钙库的释放和细胞外Ca2+的内流。8-Br-cAMP 和 DEX 对CTGF诱导的[Ca2+]i的升高有抑制作用。
|
