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大鼠视杯视网膜干细胞生物学特性及诱导分化特性的研究*
作者:黄小勇  …  文章来源:第三军医大学西南眼科医院 重庆 400038  点击数1954  更新时间:2005/8/19 8:54:15  文章录入:aya610  责任编辑:西南眼科

目的 对体外培养的大鼠视杯视网膜干细胞(OC-RSCs)的生物学特性和体外诱导分化特征进行研究,为获得定向分化确切、易于富集纯化、不混有成熟细胞的视网膜细胞移植材料的可行性以及细胞来源提供理论依据。方法 分离和培养的Long Evans大鼠尾芽胚期(第12.5天)OC-RSCs,观察其体外形态和生长特点,采用流式细胞技术检测第三代细胞的CHX10阳性率,进行细胞周期和生长曲线检测,并分析不同浓度胎牛血清(FBS)诱导后对OC-RSCs分化的影响,以及添加RA、VEGF后对OC-RSCs分化为rhodopsin阳性细胞的影响。结果 OC-RSCs连续传代三次后,CHX10阳性细胞占92%,并具有以下特征:⑴细胞形态:均呈集落样半贴壁状态生长,形态规则;⑵超微结构:核/浆比较大,线粒体和粗面内质网等细胞器较丰富,未见高尔基体;⑶细胞增殖能力:8.5%的细胞处于S期,群体平均倍增周期约36 h,传代培养至第8代,细胞的增殖能力未见明显改变。⑷体外分化特点:不同浓度FBS诱导OC-RSCs 21天后分化为成熟视网膜细胞比例不同,0.5%FBS诱导后,GFAP 阳性细胞占71.2%, rhodopsin阳性细胞仅3.0%;2.5%FBS诱导后,GFAP 阳性细胞占60.4%,rhodopsin阳性细胞达12.6%;5%FBS诱导后,GFAP 阳性细胞占52.4%,rhodopsin阳性细胞占10.9%;10%FBS诱导后, GFAP 阳性细胞为43.9%,rhodopsin阳性细胞占11.8%。0.5M RA+2.5%FBS诱导21天后,rhodopsin阳性细胞达34.3%,20ng/ml VEGF +2.5%FBS诱导21天后,rhodopsin阳性细胞占29.3%。结论 ⑴从大鼠E12.5d视杯中分离和培养的细胞增殖能力强、具有自我更新能力,能向多种成熟视网膜细胞分化,在传代三次后高度纯化,是视杯来源、易于纯化、分化确切的视网膜干细胞(Optic cup retinal stem cells, OC-RSCs);⑵胎牛血清浓度不同,OC-RSCs分化为各类型视网膜细胞的比例不同,随胎牛血清浓度的升高,分化出现的GFAP阳性细胞比例呈下降趋势;2.5%胎牛血清诱导OC-RSCs分化为rhodopsin阳性细胞的比例最高;RA和VEGF可作为一种有效的诱导因子促进OC-RSCs向感光细胞分化,其中RA的作用更强。

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