| 目的 眼球破裂伤造成严重视力下降或视力丧失，损伤机制尚不十分清楚。文献检索尚未见报道。本研究利用汽枪枪弹制做弹伤性兔眼球破裂伤，观察兔眼破裂伤后视网膜早期临床表现、病理变化以及光感受细胞损伤机制。
方法 健康无眼疾白色家兔48只,外眼及眼底检查正常，体重为2.5～3.0kg。随机分为正常对照、伤后1h、3h、6h、12h、24h六组，每组8只。家兔麻醉后，用自制汽枪自兔耳根后缘与眼球正中连线的角膜缘内1mm沿角膜平面射击，汽枪子弹从面鼻根部射出，形成眼球破裂伤模型。于伤后1h、3h、6h、12h、24h时行眼电生理检查并处死实验兔，立即摘除眼球。切除角膜后以4%多聚甲醛磷酸缓冲液固定24h，逐级酒精脱水，二甲苯透明，石蜡包埋备用。将包埋好的眼球标本，平行于视神经矢状轴且以其为平面的视网膜进行连续切片8张,切片厚度为4μｍ,每2张分别行HE染色、p53、bcl-2、细胞原位凋亡检测。HE染色组织切片行光镜及超高倍显微镜观察（ACT-2000型超高倍显微诊断系统）。光镜下观察: TUNEL法细胞凋亡、p53和bcl-2蛋白阳性表达图像经过高清晰彩色病理图像分析系统(HPISA-1000)处理 (每张切片取4个视野,每个视野面积为0.2mm×0.2mm),计算视野中呈棕黄色阳性染色的细胞数，定量分析视网膜组织中p53、bcl-2的表达及细胞凋亡情况。应用SPSS10.0统计软件，进行变量转换，单因素方差分析和相关分析等统计学方法处理
结 果
1．临床表现 汽枪弹击伤兔眼后见伤眼结膜立即充血、水肿、角膜伤口可见房水溢出，虹膜、晶体脱出，随后15秒至1分钟发生眼球内出血自伤口处溢出。
2．眼电生理结果 正常8只兔眼视网膜电图ERG-b波振幅为103.5±16.841mv,实验组 1h 、3h、6h、12h、24h所有伤眼 ERG检查ERG-b波振幅消失，呈息灭型波型。
3．病理检查 HE染色光镜及超高倍显微镜观察：所有伤眼可见脉络膜上腔出血,玻璃体内可见大量红细胞,视网膜脱离，偶见浅层巩膜出血、睫状体与巩膜分离。1～3h时视网膜感光细胞的锥杆层有碎裂改变,其它结构无明显改变。6～12h时视网膜内、外核层明显空泡变性，神经节细胞核少量固缩等明显改变。24h时视网膜变薄、结构不清紊乱。
４．免疫组织化学及细胞凋亡 对照组及各实验组bcl-2均无明显表达。p53 在3h开始在内、外核层及神经节细胞层有少量阳性表达，6～12h明显增多，24h略有下降。细胞凋亡6h在神经节细胞和内、外核层有少量表达，12-24h染色阳性的细胞明显增多。 本试验中：Bcl-2对照组与实验各组经方差检验，差异均无显著性（P>0.05）；正常视网膜组织细胞未见p53表达，经单因素多重比较方差分析，对照组与伤后1h组差别无显著性P=0.053，与伤后3、6、12、24h之间的比较差异极显著（P=0.00）；伤后6h和24h p53蛋白的表达无显著性P=0.807；视细胞凋亡在伤后6h出现，方差分析，对照组与伤后1h组差别无显著性P=0.062，对照组与伤后3h差异具有显著性P=0.005、与6、12、24h之间的比较有极显著差异性（P=0.000）。；伤后12h和24h 细胞凋亡的阳性表达无显著性（P=0.628）。凋亡指数统计结果对照组与伤后1h组差别无显著性P=0.019，伤后1h与伤后3h差异无显著性P=0.022，伤后12h、24h之间的比较无显著差异性。（P=0.392）；伤后3h 、6h 和12h细胞凋亡指数有有极显著差异性，P=0.000。相关分析显Bcl-2与p53及细胞凋亡无明显关系，而p53与细胞凋亡存在显著相关P<0.05。
结 论 本研究运用汽枪制做眼球破裂伤模型，伤情基本一致，制做简单、重复性好，便于对比研究，是眼球破裂伤理想的动物模型。眼球破裂伤伤情非常严重，光镜下视网膜在6h出现明显病理损害，12-24h即出现不可逆改变。眼球破裂伤视细胞的损伤是多因素共同作用的，其中视细胞凋亡是伤后视网膜损伤的重要机制，p53蛋白的过表达与视细胞凋亡关系密切，bcl-2蛋白在正常及伤后视网膜中几乎无表达，与视细胞凋亡无关。 |
