| 目的：探讨蓝光导致人视网膜色素上皮（retinal pigment epithelium,RPE）细胞损伤的分子机理，以及与线粒体膜通透性转运（mitochondrial permeability transition,MPT）的关系。方 法：原代与传代 人RPE 细胞的体外培养，并用蓝光进行不同强度和不同时间的光照处理；人RPE 细胞凋亡相关检查：TUNEL 染色﹑透射电镜和流式细胞仪检测；用罗丹明 123 荧光染料孵育 人RPE 细胞，流式细胞仪检测线粒体膜电位（ΔΨ m ）；用酶联免疫法测定cytochrome C和 Caspase-3的活性。结 果：传代后细胞由多角形向椭圆形、不规则形或梭形成纤维细胞转变，胞浆内色素颗粒减少甚至消失。TUNEL染色阳性细胞的体积缩小变圆，胞核浓缩，边聚成新月形或帽状，细胞核碎裂成数个，细胞膜出胞。透射电镜观察发现细胞内线粒体肿胀，线粒体内膜嵴消失；粗面内质网扩张；溶酶体增加，内含代谢产物。Annexin V-FITC/PI双染流式细胞检测：低于一定阈值（500±100Lux）的光照对RPE细胞损伤较轻，细胞凋亡及坏死随光照强度的增强而增加；在2000±500Lux光照强度，随着光照时间延长，RPE细胞凋亡数量没有增加，而细胞坏死逐渐增加；2000±500Lux光照6小时，光照后6、12小时损伤以细胞凋亡为主，细胞坏死数量增加不明显，但随着时间延长，凋亡继发坏死细胞和坏死细胞明显增加。线粒体膜电位检测：不同强度的蓝光照射人RPE细胞，荧光强度均明显下降，并随光照强度的增加呈逐渐下降趋势；在2000±500Lux光照强度，光照低于一定时间（3小时），RPE细胞荧光强度无明显变化，当光照达到一定时间（6小时）时，荧光强度明显下降；2000±500Lux光照6小时，光照后6小时，荧光强度开始明显下降，一直持续到光照后48小时。2000±500Lux光照强度，光照6小时和12小时，两组光照后24及36小时，Cyt C的浓度明显升高，光照后24小时，后者 Cyt C的浓度明显高于前者。未检测到Caspase-3活性变化。结 论：蓝光照射可引起体外培养的人RPE细胞损伤，损伤形式有凋亡、凋亡继发坏死及坏死，损伤程度呈光照强度和光照时间依赖性。一定强度和时间的蓝光照射培养的人RPE细胞，可引起线粒体膜通透性转运，表现为线粒体膜电位降低和细胞色素C释放，但没有检测到Caspase-3活性变化。 |
