| 目的 分别从蛋白质和mRNA水平了解体外培养牛眼小梁细胞是否表达组织型谷氨酰胺转移酶(tissue transglutaminase tTG)。方法 采用组织块法体外培养牛眼小梁细胞,取第三代细胞鉴定后用于实验①应用免疫组化法(SABC法)检测tTG蛋白在细胞内外的表达。②采用半定量RT-PCR法检测目的基因tTG在mRNA水平的表达。结果 体外培养细胞符合牛眼小梁细胞的特点。免疫组化染色的阳性信号位于在胞浆内，阴性对照未见阳性信号。RT-PCR扩增得到单一条带，经检测其序列与已知序列完全一致。结论 牛眼小梁细胞自身产生和分泌tTG。tTG属谷氨酰胺转移酶家族，在钙离子的存在下，可催化γ-谷氨酰胺与赖氨酸ε-氨基的共价交联或催化底物形成多聚体，在维持细胞外基质的稳定方面起着重要作用；此外，tTG尚具有水解GTP/ATP，参与信号的传导，是一种多功能的蛋白质。在眼部，已有研究表明，tTG参与年龄相关性白内障和增生性玻璃体视网膜病变的形成.由于牛眼小梁细胞是目前研究人眼小梁细胞生物学功能的良好替代材料,本实验应用免疫组化和RT-PCR等方法检测体外培养牛眼小梁细胞tTG的表达,旨在为原发性开角型青光眼的发病机理和治疗研究提供新的理论依据. |
