目的:
甲状腺相关眼病患者眼眶成纤维细胞可依据是否表达CD90可分为两个亚群,本研究分离这两个细胞亚群,分别与TGF-β1作用,分析比较代表肌成纤维细胞标志的α-SMA基因、TGF-β1的下游基因结缔组织生长因子基因表达。
方法:
培养TAO病人和正常对照眼眶成纤维细胞,免疫磁分离法分离CD90+和CD90-的眼眶成纤维细胞。TGF-β1诱导CD90+和CD90-成纤维细胞亚群转化为肌成纤维细胞(MFB),RT-PCR法检测MFB诱导过程中CD90+和CD90-成纤维细胞亚群表达代表MFB标志的α-SMA mRNA、TGF-β1的下游基因结缔组织生长因子CTGF mRNA的情况,分析时间和剂量效应关系。
结果:
TAO眼眶成纤维细胞在静息状态有一定的CTGF、α-SMA。TGF-β1上调CTGF mRNA表达,3小时起效,12小时达峰值,此时CD90+细胞CTGF mRNA表达约为对照的13倍,CD90-细胞的增加幅度较小,于3小时时增加至空白组的3倍后不再上升。1ng/ml 及以上的浓度TGF-β1均能有效地刺激CD90+细胞CTGF的表达增加,其中1ng/ml的浓度的TGF-β1 作用小于其他较高的浓度,5ng/ml及以上的浓度作用相当,组间两两分析无差异。 1ng/ml TGF-β1 不能显著提高CD90-眼眶成纤维细胞细胞CTGF的表达,5ng/ml及以上的浓度作用相当,组间两两分析无差异。TGF-β1上调α-SMA mRNA表达,CD90+细胞于24小时达峰值,并持续较长时间,约为静息状态的35倍;CD90-细胞的增加幅度明显比CD90+细胞低,于作用3小时后,涨至静息状态的4倍时就不再增加,维持至12小时,然后缓慢下降。1ng/ml 及以上的浓度TGF-β1均能有效地刺激CD90+细胞和CD90-细胞α-SMA mRNA的表达增加(P﹤0.01),各种浓度的TGF-β1 作用相当,组间两两分析无显著差异。
结论:
TGF-β1明显上调CD90+成纤维细胞CTGF、α-SMA mRNA表达,TGF-β1通过CTGF介导CD90+成纤维细胞转化为MFB。
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