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Notch信号对SD大鼠视网膜干细胞分化的作用研究 |
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作者:张锟,高… 文章来源:中南大学湘雅二医院眼科 410011 点击数:784 更新时间:2006/6/22 23:38:37
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目的:
观察Notch信号对体外培养的SD大鼠胚胎视网膜干细胞增殖分化的影响。
方法:
1、从胎龄16天SD大鼠胚胎视网膜神经上皮分离视网膜细胞,用悬浮培养体系培养,进行形态学观察,并用免疫细胞化学法鉴定细胞类型和分析Notch信号的表达。
2、将培养的细胞分为两组,分别加入不同成分的培养基:实验组即Notch信号抑制组,培养基成分为DMEM/F12+N2+5%FBS+10µM γ-Secretase Inhibitor X+1%DMSO;对照组培养基成分为DMEM/F12+N2+5%FBS+1%DMSO。培养14天后行免疫细胞化学法鉴定细胞类型和分析Notch信号的表达,比较两组间各种抗原表达的阳性率。
结果:
1、原代及传代培养的视网膜干细胞大部分表达Notch1胞内段及其下游转录因子Hes1,少量细胞表达bHLH转录因子NeuroD和Mash1;扩增的细胞自发分化后大量细胞表达bHLH转录因子NeuroD和Mash1,少量细胞表达Notch 1胞内段和Hes1。
2、实验组Notch信号被抑制后,Nestin、GFAP阳性率显著低于对照组,ß-Tubulin阳性率显著高于对照组,而Recoverin阳性率与对照组差异无显著性。
结论:
1、Notch1信号有利于视网膜干细胞状态的维持,可能参与了对体外培养的视网膜干细胞分化的抑制。
2、抑制Notch信号可促进体外培养的视网膜干细胞向神经元分化,同时也抑制了Müller细胞的分化。
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会议投稿录入:royphone 责任编辑:毛进 |
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