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| RPE细胞移植研究 |
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作者：徐国兴 … 文章来源：福建医科大学附属第一医院 福建省眼科研究所(350005) 点击数：2077 更新时间：2006/6/28 21:41:26 
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目的:为研究人类及猴视网膜色素上皮细胞移植传代/增殖培养的免疫活性影响;测定原代及传代培养的视网膜色素上皮细胞MHC I、MHC Ⅱ类分子以及协同刺激分子ICAM-1的表达状况;研究视网膜色素上皮细胞免疫排斥发生的机制及不同的处理因素对视网膜色素上皮免疫活性的影响;同种异体的视网膜色素上皮细胞移植后对视功能影响。方法：一、 视网膜色素上皮细胞的原代、传代培养及鉴定;二、猴RPE细胞的5-BrdU标记;三、LPA、TGF-β1、TGF-β2、PDGF对视网膜色素上皮细胞增殖的影响;四、人RPE细胞体外培养转分化的研究五、人视网膜色素上皮细胞移植的免疫学研究；六、传代培养视网膜色素上皮细胞及移植的视网膜色素上皮细胞的超微结构研究；七、 猴、人视网膜色素上皮细胞移植后对视功能影响的研究。结果1、人类视网膜色素上皮细胞体外培养时形态由上皮细胞特征变化成为间质样细胞；2、细胞角蛋白表达与传代代数呈负相关（r =-0.753，P <0.000），α-平滑肌肌动蛋白表达与传代代数呈正相关（r =0.657，P <0.000）；3、角蛋白18表达高密度组较低密度组强（P <0.001）；而α-平滑肌肌动蛋白表达高密度组较低密度组弱（P <0.05）。 hRPE细胞各代形态 ;hRPE细胞各代角蛋白免疫细胞化学染色 ;hRPE细胞各代α-SMA免疫细胞化学染色 ‘hRPE细胞不同密度接种时角蛋白免疫细胞化学染色。 结论人类视网膜色素上皮细胞体外培养转分化主要是体内外环境差异引起；人类视网膜色素上皮细胞在眼球内病理性状态下发生转分化，可能在病理性增生性玻璃体视网膜疾病中起重要作用。1、 正常hRPE细胞基础表达HLA-ABC类分子、低表达HLA-DR类分子、ICAM-1分子。2、IFN-γ可增强HRPE细胞HLA-ABC、HLA-DR和ICAM-1的表达（P<0.001）；TGF-β1 和TGF-β2对HRPE细胞基础性HLA-ABC、HLA-DR和ICAM-1的表达无影响（P>0.05）； TGF-β1 和TGF-β2可明显下调IFN-γ诱导HRPE细胞HLA-DR的表达（均P<0.001）； TGF-β2可下调IFN-γ诱导HRPE细胞HLA-ABC的表达（P=0.48）。3、 IL-10对HRPE细胞基础性HLA-ABC、HLA-DR和ICAM-1的表达无影响（P>0.05）； IL-10可明显下调IFN-γ诱导HRPE细胞HLA-DR的表达（P<0.001）。4、LPA组与对照组间hRPE细胞表面HLA-ABC、HLA-DR、ICAM-1的阳性细胞率和平均荧光强度组间差异无统计学意义（各指标均P >0.05）。 5、 体外传代培养时HRPE细胞HLA-ABC表达下调，表达量与传代代数呈负相关(阳性细胞率：r = -0.924，P<0.001；平均荧光强度： r = -0.820，P<0.001)；体外传代培养时HRPE细胞HLA-DR表达量与传代代数无明显相关；体外传代培养时HRPE细胞ICAM-1表达上调，表达量与传代代数呈正相关(阳性细胞率： r =0.914，P<0.001；平均荧光强度： r =0.828，P<0.001)。6、IFN-γ可增强HRPE细胞的抗原性，参与HRPE移植后的免疫排斥和炎症反应；7、TGF-β1 和TGF-β2可降低HRPE细胞的抗原性，与HRPE细胞基础性表达HLA-ABC、DR有关，参与视网膜下腔的免疫赫免，关闭免疫信号，在避免HRPE细胞移植后T细胞特异的免疫排斥反应中起重要作用。 8、IL-10可降低HRPE细胞的抗原性并抑制抗原呈递，可诱导HRPE移植时免疫耐受或免疫赫免。结论 LPA对hRPE免疫活性无影响，可利用LPA对RPE细胞的促增殖作用体外扩增细胞，及为治疗RPE细胞变性性疾病提供新的思路。HRPE细胞移植排斥反应主要是慢性排斥反应；体外传代培养HRPE细胞移植时抗原性下降，可降低急性排斥反应的发生率，但粘附分子（ICAM-1）增加，增高慢性排斥反应的发生率。采用外路法将供体RPE细胞成功移植在受体眼视网膜下腔，且不破坏受者视网膜，为临床RPE移植提供可借鉴的途径。眼杯消化法是体外快速获取大量高纯度、高活力的RPE细胞用于移植的好方法。RPE细胞移植将为视网膜色素上皮细胞变性患者提供一新的治疗途径。同种异体的视网膜色素上皮细胞移植后视功能影响移植的猕猴RPE细胞的生物学及超微结构研究(略)。
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| 会议投稿录入：xgx爱眼 责任编辑：毛进 |
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