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| 以脱细胞角膜基质为载体进行组织工程学角膜内皮植片的构建的实验研究 |
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作者：邵应峰 陈… 文章来源：中山大学中山眼科中心 510060 点击数：950 更新时间：2006/6/30 1:46:04 
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| 【目的】
探讨获得有适当强度，细胞外基质完好，细胞成分去除干净的脱细胞角膜组织的处理方案。探讨脱细胞角膜组织的体外细胞毒性和体内生物相容性。探讨以脱细胞角膜未载体进行体外培养的角膜内皮细胞负载的效果。
【材料与方法】
1.研究材料：⑴－80℃冰箱保存的人眼球。⑵3T3细胞株。⑶新西兰大白兔24只。
2. 以TritonX－100、DNAse Ⅰ, RNAse A，为主要试剂对角膜进行脱细胞处理。用病理学方法进行鉴定。
3.体外细胞毒性研究：将脱细胞角膜组织与3T3细胞共培养。设立空白对照，并以未经脱细胞处理的冰冻保存角膜为阴性对照，观察细胞形态。待细胞达70％融合时进行传代，细胞计数，计算DOT。SPSS13.0软件统计分析。
4.体内生物相容性研究：对照和试验组新西兰大白兔各12只，将冰冻及脱细胞角膜组织植入角膜板层之间。参照Holland方法记录排斥反应指数RI。周定期宰杀动物，取角膜进行病理检查。
5.内皮细胞负载：用含15％胎牛血清、10ng/ml EGF、10ngml bFGF和三抗的M199/F12(1:1)混合液制备角膜内皮细胞悬液，浓度为1×106。将脱细胞角膜后弹力层向上铺平于12孔细胞培养板底部，分别加入上述细胞悬液1ml进行培养。12周后用苔盼蓝和茜素红染色。在光学显微镜下观察。用Scion Image软件分析，处理。
【结果】
1.用上述方法取得的脱细胞角膜中细胞成分去除彻底，胶原排列保持完好。
2.组3T3细胞培养，细胞形态无显著改变，DOT无统计学差别。
3.对照组全部于术后2－4周发生排斥反应，角膜水肿，大量新生血管形成。
病理切片检查发现植片周围大量的巨噬细胞、单核细胞和淋巴细胞聚积。试验组未间排斥反应，各观察时间点的平均RI均低于5。裂隙等检查见角膜于术后8周开始接近透明，术后16周以与正常角膜难以区别。病理检查发现术后1个月内在植片周围仅有少量炎症细胞浸润。此后未发现有炎症细胞。术后32周，脱细胞角膜植片内有少量角膜基质细胞长入。
4.脱细胞角膜后弹力层表面可见单层角膜内皮细胞，排列紧密，形态多样，以卵石样居多。平均密度为2311.2±54.7个/mm2。
【结论】
1.脱细胞角膜材料对体外培养细胞无毒性。
2.脱细胞角膜材料有较好的生物体内组织相容性，并可在短期内恢复透明。
3.以脱细胞角膜材料为载体进行角膜内皮细胞负载，可形成单层角膜内皮细胞。且密度基本达到临床手术要求。
本研究受：卫生部临床重点项目、985项目二期、广东省自然科学基金、凯思奖学金海外研究项目资助
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| 会议投稿录入：syingfeng 责任编辑：毛进 |
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