| 目的 血-视网膜屏障是保证视网膜干燥状态和正常功能的前提条件，糖尿病性黄斑水肿即是血-视网膜屏障破坏的结果。视网膜血管内皮细胞间的紧密连接是血-视网膜屏障的重要组成部分，本实验研究高浓度葡萄糖对培养的视网膜血管内皮细胞紧密连接形成的影响，探讨糖尿病视网膜病变组织水肿的发病机理。
材料和方法 1.培养牛视网膜毛细血管内皮细胞：取新鲜牛眼视网膜，剪碎，0.25%胶原酶消化2小时，100mm滤网过滤后洗下滤网上组织，置DMEM培养基（内含15%胎牛血清，100U/mL青霉素，100mg/mL链霉素，2ng/ml碱性成纤维细胞生长因子，100ng/ml肝素）中培养。免疫组化方法检测VIII因子表达，以鉴定内皮细胞。2.高浓度葡萄糖对细胞紧密连接蛋白表达的影响：细胞在含20mmol/L葡萄糖的培养液中分别培养１周和2周，Trizol方法提取细胞总RNA，RT-PCR方法检测zo-1, zo-2, zo-3, claudin-2, occludin的基因转录情况。3.细胞间连接的形态：细胞在含20mmol/L葡萄糖的培养液中培养１周，固定、干燥后进行扫描电镜观察。4.紧密连接蛋白occludin在糖尿病大鼠视网膜的表达：Wistar大鼠腹腔注射链脲佐菌素50mg/kg建立糖尿病模型。糖尿病诱导后3月，做视网膜铺片的免疫组化检查，观察occludin在视网膜血管的分布。
结果 1.所培养细胞经免疫组化方法证实为视网膜血管内皮细胞。2. 高浓度葡萄糖作用下，内皮细胞zo-1, zo-2, zo-3, claudin-2,的表达较正常培养条件明显下调，并随时间延长，呈逐渐下降趋势。3.扫描电镜观察发现，在高糖作用下，内皮细胞间隙明显增大，细胞间连接不完整。4.免疫组化显示，糖尿病诱导后3月，occludin在大鼠视网膜的表达较正常大鼠明显减少，在血管壁的分布不均。
结论 高浓度葡萄糖能够显著抑制视网膜毛细血管内皮细胞紧密连接的形成。血管内皮细胞间紧密连接破坏可能是糖尿病视网膜病变组织水肿的原因。
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