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| 高浓度葡萄糖对培养的人视网膜微血管内皮细胞屏障功能的影响 |
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作者：原公强 … 文章来源：山东省眼科研究所 266071 点击数：1540 更新时间：2006/7/7 10:29:02 
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| 目的 体外培养人视网膜微血管内皮细胞（Human Retinal Capillary Endothelial Cell，HRCEC），检测高浓度葡萄糖对培养的HRCEC屏障功能的影响，并探讨产生影响的机理。
材料和方法 通过免疫磁珠分离等方法，取得纯化的HRCEC，并通过免疫组织化学和流式细胞术进行鉴定。传代培养细胞，传至第4代的细胞汇合后随机分为低糖、中糖和高糖3组，分别更换为葡萄糖浓度5.6mmol/L、15.6mmol/L、25mmol/L的DMEM培养液。更换培养液后第3d和第1、2、3、4周，以MTT法观察各组HRCEC的活性，细胞电阻计测量各组HRCEC的跨内皮细胞电阻（Transendothelial Electric Resistance，TER），Western Blot法观察各组HRCEC表达紧密连接蛋白Occludin和ZO-1的情况，RT-PCR观察各组HRCEC紧密连接蛋白Occludin和ZO-1基因转录的情况。
结果 1.原代和传代培养的HRCEC均可形成稳定的细胞单层， HRCEC占细胞总数的95%以上。2.HRCEC在不同浓度葡萄糖培养液中在各个时间点上测得的细胞活性没有差异。3.细胞传代后，TER逐渐升高，于第8~10d达到稳定，维持于29.83±2.49Ω•cm2。更换不同浓度培养液后，低糖组TER波动于27.25±4.22Ω•cm2~30.00±2.98Ω•cm2，各时相比较差异无统计学意义；中等组TER逐渐下降，其中第1周到第3周的TER下降迅速，各个时间的TER比较，差异均有统计学意义；在高糖组，更换培养液3d的TER即迅速下降为15.75±3.30Ω•cm2，与换液前差异有统计学意义；其后继续下降，变化无统计学意义。4.在各时相随葡萄糖浓度的升高，Occludin和ZO-1的表达下降；低糖组Occludin的表达在各个时间点没有发生明显变化，中糖和高糖组，Occludin的表达随时间延长有明显的下降；各组ZO-1表达的变化不明显。5.在各时相随葡萄糖浓度的升高，Occludin基因转录水平降低，而ZO-1基因的转录水平与葡萄糖浓度的改变无明显相关；各组随时间延长，Occludin基因转录水平的变化不明显，而ZO-1在高浓度葡萄糖组基因转录水平有明显下降，但低浓度组和中等浓度组的变化不明显。
结论 高浓度葡萄糖不影响HRCEC的细胞活性，然而TER会随着葡萄糖浓度的升高而降低，这可能与紧密连接蛋白Occludin和ZO-1的基因转录和蛋白表达下降有关。
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| 会议投稿录入：aya610 责任编辑：毛进 |
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