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| 慢性高眼压相关基因cDNA抑制消减文库的建立及鉴定 |
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作者：王秀青 … 文章来源：第三军医大学大坪医院野战外科研究所眼科 400042 点击数：1718 更新时间：2004/5/29 
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| 目的：建立与兔慢性高眼压视网膜损害相关的cDNA抑制消减文库并鉴定。
方法：
1. 通过甲基纤维素注入兔眼前房的方法建立兔高眼压模型，取其视网膜组织提取总RNA 及mRNA。
2. 将mRNA逆转录为cDNA，利用抑制性消减杂交技术进行慢性高眼压视网膜组织差减文库的构建，斑点杂交行初步筛选。
3. 采用原位杂交的方法进行兔慢性高眼压视网膜损害相关基因片段的细胞定位。
结果：
1. 提取的视网膜总RNA及纯化后mRNA符合进一步实验的要求。消减效率分析消减效果较好。构建差减文库和进行初步筛选、选择性测序，得到有效序列16个，将这些阳性序列在NCBI-BLAST中比对发现其中2个有高度同源序列（高于90%）。
2． 筛选出的一个已知基因片段（编号F9）与Rap和Rab家族基因相似性高达99%。将F9片段标记生物素作为探针进行视网膜组织原位杂交，确定其大量表达于实验组视网膜组织中的神经节细胞及内核层细胞，而对照组视网膜组织不表达。
结论：
1. 成功建立了用于筛选兔慢性高眼压相关基因的消减杂交cDNA文库。
2. 与Ras基因相似率达99%的F9片段广泛存在于慢性高眼压5周后的兔视网膜中，说明该基因片段在慢性高眼压视网膜损害中具有重要的作用，该基因功能有待进一步研究。
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| 会议投稿录入：毛进 责任编辑：毛进 |
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