目的 探讨PWZL质粒介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因 (herpes simplex virus-thymidine kinase ,HSV-tk) 和大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶基因(E. coli2cytosine deaminase ,CD)系统在前体药物作用下对晶状体上皮细胞的杀伤效应。 方法 以PWZL质粒为载体将双自杀基因转入体外培养之晶状体上皮细胞,然后使用不同浓度的前体药物5-氟胞嘧啶(Flurocytosine,5-FC)和/或丙氧鸟苷(Ganciclovir,GCV)作用于肯定转染的细胞,光镜观察细胞生长情况,MTT比色法计算细胞存活率,统计各组细胞的存活率差别,并进行旁观者效应分析。结果 CD/TK基因可成功接入PWZL质粒并在晶状体上皮细胞中表达,对正常细胞的生长未造成特别影响;单独或联合应用前体药物均可对转染细胞进行杀伤,联合用药在小剂量即可产生较大杀伤力,且具有旁观者效应。 结论 PWZL质粒可成功、有效的将CD/TK基因转入晶状体上皮细胞并能获得稳定表达;采用双自杀基因联合使用前体药物可减少前体药物的使用量;联合用药的高杀伤力和旁观者效应可弥补质粒载体转到效率低、表达时间短的缺点。
|