| 目的 光损伤是眼科临床常见的病理状态，也是许多致盲眼病如年龄相关性黄斑变性(age-related macular degeneration, AMD)的主要病因。随着人口老龄化，AMD患者逐渐增加，AMD已成为老年人首要的致盲原因 。另外，随着大量眼科诊疗器械的应用，医源性视网膜光损伤也不断增加，而光损伤以及损伤防御机制目前尚无定论，因此光损伤及其防护的研究显得十分重要。有研究结果表明,视网膜光损伤过程中RPE细胞的改变最先发生,而光感受器的改变是继发产生的。因此，RPE可能是视网膜光损伤的关键部位。本实验应用二维电泳技术比较光损伤与正常的视网膜色素上皮细胞蛋白质的表达差异，探索光损伤细胞的功能蛋白变化。近年来，二维电泳等蛋白质组学方法已经越来越多的被运用于眼科研究中，但目前尚未见到光损伤的色素上皮细胞蛋白质组研究的相关报道。本实验通过对可见光损伤的人视网膜色素上皮细胞蛋白质表达图谱的研究，为寻找RPE细胞光损伤发生的可能机制奠定基础。
方法 运用冷白光以2200±300Lx光照人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19)6小时建立光损伤模型；细胞经过蛋白裂解抽提、蛋白浓度测定、等电聚焦(isoelectric focusing,IEF) 、十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) 、凝胶染色、软件图像分析处理。
结果 视网膜色素上皮细胞蛋白在二维电泳凝胶中达到了良好的分离，凝胶背景较低,，且相同条件下同一批样品重复三次实验的电泳图谱重复性好，经过ImageMaster软件分析得到清晰可见的蛋白斑点数390±10个，分离所得的蛋白斑点分布范围广泛，基本遍及pH4～7的整块凝胶，斑点大小均匀,相对位置对应良好。找到蛋白变化量超过二倍的差异点11个，光损伤细胞内8种蛋白表达上调,1种下调，2种缺失。
结论 视网膜色素上皮细胞在眼内发挥着极为重要的生理作用，其变性、损伤会影响光感受器细胞的代谢和功能，甚至导致视力损害。光损伤后差异表达的蛋白质可能在光损伤细胞活动中发挥重要作用，获取这些蛋白斑点所代表的蛋白质信息将依赖于进一步实验切取差异蛋白斑点进行质谱分析确定。随着研究的不断深入,可能为我们了解这些蛋白的功能及其在信息网络如何发挥调节作用是非常有用的, 并最终可能寻找到某些蛋白质作为药物靶点,为找到新的治疗措施及开发新的治疗药物有一定意义。
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