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| TGF-β2反义寡核苷酸对兔角膜创伤愈合的影响 |
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作者：郑广瑛 连… 文章来源：郑州大学第一附属医院眼科 点击数：1024 更新时间：2007/5/14 23:29:52 
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| 目的 在角膜损伤后愈合过程的早期，通过药物干预减少瘢痕形成从而降低角膜散光，为临床外伤性角膜散光的防治提供理论依据。方法 采用实验动物兔制作角膜穿孔伤模型，设计应用TGF-β2的反义寡核苷酸（TGF-β2 antisense oligonucleotide，TGF-β2 ASON）转染角膜外伤缝合术后的瘢痕组织，然后通过裂隙灯观察、HE染色、免疫组化和荧光定量PCR等检测手段从大体形态、组织结构、细胞蛋白数量及基因水平等不同层面观察分析TGF-β2反义寡核苷酸对TGF-β2的活性的抑制作用而影响角膜创伤愈合的过程。 结果 裂隙灯观察：创口局部炎症反应较对照组明显减轻；HE染色组织病理学观察：术后4d ~7d，基质层成纤维细胞增生达到高峰，平均每个高倍镜下9~12个染色细胞；但与同期对照组（平均每个高倍镜下18~22个染色细胞）相比明显减少，差异具有统计学意义；免疫组化观察：α-肌动蛋白（α- SMA）阳性的成纤维细胞数于术后7d达到高峰，术后14d回到基线水平，随着造模时间的延长，α- SMA 阳性的成纤维细胞数逐渐减少，并且在术后4d和7d，α- SMA阳性的成纤维细胞数均比对照组少，差异具有统计学意义（P <0.05）。纤维连接蛋白（FN）染色明显减弱，呈板层散在分布于角膜伤口周围的基质层内，与对照组相比差异具有统计学意义（P <0.05）；逆转录实时荧光PCR技术定量分析：术后4d、7d、14d、28d ，TGF-β2在兔角膜中的mRNA相对表达量分别为0.0851±0.0028、0.1389±0.0079、0.0753±0.0026、0.0658±0.0007，与同时期对照组比较差异均有统计学意义（p＜0.05）。 结论 １.TGF-β2 ASON可特异性的阻断TGF-β2 的转录和翻译，从基因水平抑制TGF-β2 mRNA的合成并影响TGF-β2活性，从而调控角膜损伤修复的愈合过程，即抑制成纤维细胞的活化增生、胶原和纤维连接蛋白等细胞外基质的堆积，从而发挥抗瘢痕化的作用；2. 角膜损伤缝合术后成纤维细胞移行、增生最活跃的时期是术后4 d ～7 d，14 d 左右基本恢复到基线水平。TGF-β2反义寡核苷酸对α- SMA 阳性的成纤维细胞数明显的抑制作用也是在术后的14天以内，从理论上讲既抑制角膜瘢痕形成又不影响角膜创伤的愈合，在角膜损伤修复这个动态级联过程的早期，即术后14d内进行干预调控是减少术后瘢痕形成的关键。3. 实时荧光定量RT- PCR对于检测兔角膜这样微量标本的基因表达是一个切实可行的技术，具有特异性高、定量准确、结果可靠及可重复性强等优点。 |
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| 会议投稿录入：myf00079 责任编辑：毛进 |
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