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| TGFβ2特异性dsRNA载体对鼠Tenon’s囊成纤维细胞功能和增殖影响的研究 |
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作者：马建民1 … 文章来源：首都医科大学附属北京同仁医院眼科 100730 点击数：881 更新时间：2007/5/28 9:51:13 
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| 目的 构建TGFβ2特异性dsRNA质粒载体，观察和研究其对大鼠Tenon’s囊成纤维细胞TGFβ2表达的影响以及对细胞增殖的抑制作用。
方法 在对TGFβ2 siRNA筛选的基础上，设计和合成针对TGFβ2特异性发夹状dsRNA，并将其连接到pSilencerTm 3.1-H1 hygro质粒载体中，以构建TGFβ2特异性dsRNA质粒载体；以碱裂解法小提质粒，利用测序法对其进行鉴定；载体鉴定无误后，再对其进行大量扩增，然后利用QIAGEN质粒提取试剂盒对其进行提取纯化。在将所提取的TGFβ2特异性dsRNA质粒载体，利用转染试剂siPORT TM XP-1对体外培养的大鼠Tenon’s囊成纤维细胞进行转染，采用RT-PCR技术研究不同浓度载体转染后对Tenon’s囊成纤维细胞的TGFβ2mRNA表达的影响；在载体转染浓度筛选实验的基础上，进一步研究相同浓度载体转染后不同时间对Tenon’s囊成纤维细胞的TGFβ2mRNA和蛋白表达影响以及对细胞增殖的影响；在上述实验的基础上，再对比研究构建载体与其它不同处理因素对Tenon’s囊成纤维细胞TGFβ2mRNA和蛋白表达的影响以及对细胞增殖的抑制作用。
结果 载体构建后经过测序证实所合成的转化生长因子β2 dsRNA成功的连接到pSilencerTm 3.1-H1 hygro质粒载体中。将TGFβ2特异性dsRNA质粒载体转染体外培养的大鼠Tenon’s囊成纤维细胞后，其对Tenon’s囊成纤维细胞TGFβ2mRNA表达的抑制作用随浓度的增大而增强；同一浓度构建载体对成纤维细胞TGFβ2表达和其增殖的抑制作用，随着转染时间的延长而增强；构建载体对Tenon’s囊成 纤维细胞TGFβ2mRNA和蛋白表达以及对细胞增殖的抑制作用较MMC为弱。
结论 首次成功构建了TGFβ2特异性dsRNA的质粒载体。所构建的TGFβ2 特异性dsRNA质粒载体能够抑制Tenon’s囊成纤维细胞的增殖和抑制Tenon’s囊成纤维细胞TGFβ2的表达，这为今后所构建载体在动物模型上的应用提供了宝贵的实验依据。
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| 会议投稿录入：aya610 责任编辑：毛进 |
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