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| 羊膜匀浆提取液对兔角膜成纤维细胞增殖及TGF-β1mRNA表达的影响 |
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作者：唐敏，席… 文章来源：湖南长沙中南大学湘雅二医院眼科 邮编410011 点击数：1023 更新时间：2007/5/29 23:47:02 
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| 目的：研究羊膜匀浆提取液对兔角膜成纤维细胞增殖及TGF-β1mRNA表达的影响，探讨羊膜匀浆提取液抑制角膜瘢痕增生的机制。
方法：采用消化法获得原代兔角膜成纤维细胞并传代培养，应用波形蛋白和细胞角蛋白免疫细胞化学方法对培养的细胞进行鉴定。采用MTT 比色法观察三个不同等级浓度（羊膜匀浆提取液蛋白含量分别为40mg/L、80mg/L和160mg/L）羊膜匀浆提取液对兔角膜成纤维细胞增殖的影响。同时采用RT-PCR技术，检测三个等级浓度的羊膜匀浆提取液对兔角膜成纤维细胞TGFβ1 mRNA表达的影响。
结果：（1）体外培养细胞的免疫细胞化学染色显示：波形蛋白抗体表达阳性，角蛋白抗体表达阴性，证实所培养的细胞为兔角膜成纤维细胞。（2） MTT法检测结果：与对照组（OD值0.415±0.026）比较，加入不同浓度羊膜匀浆提取液的研究组兔角膜成纤维细胞增殖均显著受抑制（OD值分别为0.335±0.013、0.220±0.018、0.094±0.005），差异具有显著性(P<0.01)。（3）培养细胞的RT-PCR检测结果：与对照组（TGFβ1/GAPDH比值为1.768±0.040）比较，加入了不同浓度羊膜匀浆提取液组兔角膜成纤维细胞TGF-β1 mRNA表达（TGFβ1/GAPDH比值分别为1.519±0.669、0.617±0.014和0.622±0.031）显著降低 (P<0.01)。但中、高浓度组（80mg/L和160mg/L）之间兔角膜成纤维细胞TGF-β1 mRNA表达（TGFβ1/GAPDH比值）差异无显著统计学意义。
结论：（1）羊膜匀浆提取液具有抑制体外培养的兔角膜成纤维细胞增殖作用，并随着羊膜匀浆提取液所含蛋白浓度的增加，其抑制作用增强。（2）羊膜匀浆提取液具有抑制体外培养的兔角膜成纤维细胞TGF-β1mRNA表达的作用，并与羊膜匀浆提取液中所含蛋白的浓度有关。但当羊膜匀浆提取液蛋白浓度增加至80mg/L时，其对兔角膜成纤维细胞TGF-β1mRNA表达的抑制作用不再有显著性差异。从而为羊膜匀浆提取液抑制角膜瘢痕形成的作用机制，提供了理论依据。
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| 会议投稿录入：tommy2000 责任编辑：毛进 |
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