| 目的：构建pEGFP/缝隙连接蛋白(connexin ,Cx) 50 真核表达载体，观察其在细胞内的表达和功能情况，为进一步研究Cx50在维持晶状体透明性中的作用。
方法：根据Cx50基因序列设计PCR引物，在5′端和3′端分别添加EcoR I和KpnI 酶切位点,将PCR片段插入至有增强绿色荧光蛋白标记的真核表达载体pEGFP-N1的多克隆位点上,构建Cx50基因真核表达载体，并用PCR、酶切法和DNA测序鉴定。再经脂质体转染至宫颈癌Hela 细胞中，通过荧光显微镜检测蛋白表达。
结果：PCR、酶切法和DNA测序鉴定证实构建的质粒中含有Cx50基因。转染细胞有增强绿色荧光蛋白及Cx50的表达。
结论：成功的构建了人缝隙连接蛋白Cx50基因的真核表达载体。融合表达增强绿色荧光蛋白后，不影响缝隙连接蛋白的功能，在缝隙连接蛋白的研究中，pEGFP-N1载体可以作为一个优选载体。
|
网友评论：（只显示最新10条。评论内容只代表网友观点，与本站立场无关！）