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| 大剂量甲泼尼龙治疗大鼠视神经挫伤时效关系的实验研究 |
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作者：李志刚，… 文章来源：郑州大学第一附属医院眼科 450052 点击数：1139 更新时间：2004/5/29 
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| 目的 外伤性视神经病变是最常见的视神经损伤类型，大多为视神经间接损伤。目前国内外对于外伤性视神经病变的治疗尚处于初步探讨和研究阶段，存在诸多问题。视神经损伤后早期应用大剂量甲泼尼龙冲击治疗已在临床工作中得到广泛应用。但在实际生活中，外伤性视神经病变患者往往因经济条件、地理位置，以及当地医疗水平等种种因素所限，难以在受伤后早期（8h内）接受该治疗，对于受伤48h以后患者，大剂量甲泼尼龙治疗是否有效，效果是否明显，目前仍无统一认识。相关研究多侧重临床，基础研究涉足甚少。本实验拟研究建立致伤量均一的大鼠视神经损伤模型，于伤后48h给予大剂量甲泼尼龙治疗，观察48h后用药的效果，以期为临床用药提供一定的实验依据。
材料与方法
选用108只健康成年Wistar大鼠，体重200-230g，雌雄不限，外眼及眼底检查均正常。将大鼠分为正常组、损伤组和治疗组3组。正常组18只36眼同等条件饲养，并做相应检查。损伤组45只45眼，视神经损伤后48h给等量生理盐水对照治疗。治疗组45只45眼，视神经损伤后48h给甲泼尼龙治疗。各组按损伤后存活时间随机分为4d、7d和14d组。除正常组外，每只大鼠以自制视神经损伤器给单眼行100g损伤力维持12s。治疗组于伤后48h开始给药。甲泼尼龙首次按30mg/kg尾静脉注射，以后按5.4mg/kg.h给药，每6h给药一次，直到48h后。损伤组同时给予等容量的生理盐水。各组动物到达预定存活时间后， 4％多聚甲醛灌注，取眼球，制备视网膜铺片和切片，行脱氧核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（terminal deoxynucleotidyl transferase mediated nick-end labeling,TUNEL）染色，进行凋亡细胞计数和定位，免疫组织化学法（SP法）染色检测凋亡相关基因bcl-2和bax的表达情况。
结 果
1. TUNEL染色视网膜凋亡细胞计数及统计学分析
视网膜切片TUNEL染色阳性细胞主要位于视网膜神经节细胞层（ganglion cell layer,GCL）。正常对照组视网膜铺片见极少量凋亡细胞，4d、7d和14d阳性细胞数分别为0.13±0.07个/mm2、0.31±0.05个/ mm2和0.45±0.03个/ mm2。损伤组4d、7d和14d凋亡细胞数分别为14.57±0.27个/mm2、22.79±0.04个/mm2和5.40±0.05个/mm2。4d即有大量凋亡细胞，7d时达到高峰，14d时凋亡细胞数明显减少。治疗组4d、7d和14d凋亡细胞数分别为14.51±0.30个/mm2、22.78±0.05个/mm2和5.39±0.05个/mm2。各时间点对照组分别与损伤组和治疗组两两比较，差异有显著性（P<0.05）。治疗组与损伤组间比较，差异无统计学意义（P>0.05）。
2. bcl－2基因表达阳性细胞计数及统计学分析
视网膜切片见阳性细胞主要位于GCL。视网膜铺片显示：正常组bcl－2可见低水平表达，4d、7d和14d阳性细胞数分别为6.25±0.14个/mm2、6.66±0.25个/mm2和5.74±0.30个/mm2；损伤组4d、7d和14d阳性细胞数分别为17.47±0.31个/mm2、21.55±0.35个/mm2和27.55±0.29个/mm2，可见损伤后bcl-2表达逐渐增加；治疗组4d、7d和14d阳性细胞数分别为17.44±0.25个/mm2、21.55±0.3个/mm2和27.53±0.27个/mm2。各时间点对照组分别与损伤组和治疗组两两比较，差异有显著性（P<0.05）。治疗组与损伤组相比较，差异无统计学意义（P>0.05）。
3. bax基因表达阳性细胞计数及统计学分析
视网膜切片见bax阳性细胞主要位于GCL。视网膜铺片显示：对照组bax可见低水平表达，4d、7d和14d阳性细胞数分别为5.67±0.40个/mm2、5.91±0.43个/ mm2和5.65±0.41个/mm2；损伤组4d、7d和14d阳性细胞数分别为21.50±0.30个/mm2、33.52±1.40个/mm2和31.19±1.07个/mm2，损伤后bax表达逐渐增加，7d表达最高；治疗组4d、7d和14d阳性细胞数分别为21.57±0.62个/mm2、33.41±1.12个/mm2和31.07±1.06个/mm2。各时间点对照组与损伤组和治疗组两两比较，差异有显著性（P<0.05）。治疗组与损伤组相比较，差异无统计学意义（P>0.05）。
结 论
1. 使用自制视神经损伤器测量视神经损伤力精确至1g，致伤确切，死亡率低，建立了致伤量均一的视神经损伤动物模型。
2. 视神经损伤后48h，行大剂量甲泼尼龙冲击治疗与同等量生理盐水治疗相比，对视网膜神经节细胞的凋亡抑制程度无明显差异。本实验表明，视神经损伤48h后，大剂量甲泼尼龙治疗无明显视网膜神经节细胞保护作用。 |
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| 会议投稿录入：毛进 责任编辑：毛进 |
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