|
| 氮酮促进脂质体介导质粒DNA转染兔角膜内皮细胞的实验研究 |
|
作者：毛晓春 张… 文章来源：华中科技大学同济医学院附属同济医院眼科，武汉 430030 点击数：913 更新时间：2007/5/30 19:42:09 
|
|
| 目的 研究水溶性氮酮对体外培养的兔眼角膜内皮细胞活性及超微结构的影响，探索水溶性氮酮的眼部安全应用浓度；探讨氮酮（AZONE）促进脂质体介导质粒DNA 转染兔角膜内皮细胞的作用，观察氮酮对于脂质体转染的影响，探索提高脂质体转染效率的方法。
方法 体外培养兔眼角膜内皮细胞，采用MTT法、扫描和透射电子显微镜研究不同浓度水溶性氮酮对细胞活性和超微结构的影响；配制不同转染试剂，脂质体联合pEGFP-N1、氮酮联合脂质体及pEGFP-N1、氮酮联合pEGFP-N1 、单纯pEGFP-N1、单纯脂质体、单纯氮酮，分别处理兔角膜内皮细胞, 流式细胞仪及荧光显微镜观察细胞中绿色荧光蛋白的表达，计算并比较转染效率。
结果 浓度0.1g.L-1以下的水溶性氮酮作用24h对角膜内皮细胞的活性没有明显影响，浓度0.5g.L-1以上的水溶性氮酮作用24h，可以引起角膜内皮细胞活性下降(P＜0.01）。在浓度0.1 g.L-1以下水溶性氮酮作用10min，扫描电子显微镜可以观察到角膜内皮细胞膜的裂隙形成，而对细胞器等结构无明显损害，浓度0.5 g.L-1及以上的水溶性氮酮可导致细胞器肿胀甚至细胞死亡；脂质体转染CECS前以0.1g.L-1氮酮孵育5min，转染效率最高，单纯氮酮、单纯脂质体及对照组处理的细胞不表达绿色荧光蛋白，氮酮联合脂质体及pEGFP-N1 对兔角膜内皮细胞的转染效率为42.6%；脂质体联合pEGFP2N1 组的转染效率为21.4%；氮酮联合pEGFP-N1 组的转染效率为7.2 %。单纯质粒组的转染效率为1%，氮酮加脂质体加PEGFP-N1组转染效率高于其他转染组(P <0.01)。
结论 水溶性氮酮在浓度0.1g.L-1可以使角膜内皮细胞膜产生裂隙，而不会导致细胞活性的降低；氮酮可促进脂质体介导质粒DNA 转染兔角膜内皮细胞，在有效的转染浓度下对细胞无明显毒性，有望成为促进角膜内皮细胞基因转染的新型试剂。
|
|
|
| 会议投稿录入：maoxc 责任编辑：毛进 |
|
|
上一篇会议投稿： 成骨不全一家系突变基因检测及其眼部特征初步分析
下一篇会议投稿： 脂质体介导兔角膜内皮细胞基因转染的观察 |
|
|
| 【字体：小 大】【发表评论】【加入收藏】【告诉好友】【打印此文】【关闭窗口】 |
|
网友评论：（只显示最新10条。评论内容只代表网友观点，与本站立场无关！）