| 目的 研究豚鼠真菌性角膜炎模型的制作方法，为开展真菌性角膜炎的相关研究提供理想的动物模型。方法 健康豚鼠18只，应用25%乌拉坦腹腔麻醉。无菌条件下，板层剖除受眼角膜上皮，用接种环刮取相等面积的茄病镰刀菌菌落涂抹于角膜，行睑裂缝合，术后第2天，用108CFU/ml浓度菌液滴眼，每日两次，术后48h打开睑裂。每日裂隙灯下观察角膜病变情况，并刮取溃疡边缘及底部组织涂片行基姆萨染色，以排除细菌感染确定真菌感染。同时将刮取物接种于SDA培养基上25℃培养。分别于接种后2、4、7和14天各处死豚鼠3-5只，立即取角膜，1/2角膜片用95%乙醇固定、石蜡包埋、切片、苏木素-伊红（HE）和过碘酸-雪夫（PAS）染色，光镜下观察组织学改变及真菌孢子和菌丝；1/2角膜片行真菌培养鉴定。结果 临床观察：接种真菌后，18只豚鼠36只眼全部出现真菌性角膜炎的临床表现。接种后2天刮片显示菌丝的发现率为100%，SDA培养10天均见真菌菌落生长。接种后48h打开睑裂,可见角膜全层水肿,溃疡形成,干燥致密,粗糙不平稍隆起;接种后第5~7天,溃疡面积进一步扩大,感染达到最高峰，角膜缘开始有新生血管长入;至第10~12天,溃疡面积缩小,其周围完全被新生血管包绕;至第14天,角膜白斑形成,白斑周围无浸润,边界清楚,角膜周边有少量新生血管。病理组织学观察： HE染色：造膜后2天，角膜上皮层及基质层大量炎症细胞浸润，以中性白细胞、单核细胞为主，溃疡处角膜上皮及浅基质层缺损，溃疡周围角膜上皮肿胀，角膜基质纤维排列紊乱，基质内散在局灶性坏死。造膜后4天，角膜基质层可见大量新生血管，前房内可见中性白细胞。造膜后7天，角膜基质层出现吞噬细胞。造膜后14天，溃疡部位角膜上皮及浅基质修复，基质内较多成纤维细胞，细胞走行与基质纤维平行，基质内可见较多新生血管。PAS染色：造膜后4-7天，角膜全层可见茄病镰刀菌，菌丝平行于角膜板层生长，有分隔，圆形孢子散在生长，部分标本前房内可见菌丝和孢子。结论：通过板层刮除角膜上皮，菌落涂抹，睑裂缝合，术后菌液滴眼的方法能够成功建立豚鼠真菌性角膜炎模型，该模型具有成功率高，操作简便，可重复性强的优点，并且较符合人自然感染真菌性角膜病的过程，可用于药效学、病理学研究等，具有较高的使用价值。 |
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