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| 地塞米松对人眼小梁细胞RhoGDI和RhoA蛋白表达的影响 |
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作者：孙静 文章来源：中山大学眼科中心 510060 点击数：1046 更新时间：2007/6/4 0:17:45 
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| 目 的
目前原发性开角型青光眼的确切病因仍然不明。小梁网作为房水流出的通路，是房水排出的主要阻力部位，也是原发性开角型青光眼的主要病理部位。小梁细胞结构和功能的变化可能影响房水引流的效率，细胞内相关蛋白的表达变化，可能是开角型青光眼发病机理的分子基础，也是当前科学研究的热点问题之一。
本研究选用体外培养永生化的人眼小梁细胞株，将不同浓度的地塞米松作为激素性处理因素，观察不同处理时间细胞形态和生长状态的变化，同时应用分子生物学方法检测细胞内Rho GTP酶活性调节蛋白RhoGDI及其效应物之一RhoA蛋白的表达和变化，旨在认识地塞米松处理下人眼小梁细胞生长增殖和功能活性的变化，并进一步探讨细胞内分子水平的改变，为原发性开角型青光眼的发病机理提供新思路，也为其预防和治疗措施提供新方向。
方 法
用含15%小牛血清的DMEM/F12培养基常规培养永生化人眼小梁细胞株，倒置相差显微镜下观察细胞形态和地塞米松处理后的变化。采用MTT比色法检测10-6M和10-7M地塞米松处理1-5天的小梁细胞与对照组相比生长增殖的变化，并分别绘制两种浓度处理组和对照组细胞的生长曲线。免疫细胞化学方法检测小梁细胞内RhoGDI蛋白的表达和地塞米松处理后的变化。免疫印记法检测小梁细胞内RhoGDI和RhoA 分子的表达和地塞米松处理后的表达差异，并进一步摸索10-5M、5*10-6M、10-6M、5*10-7M和10-7M地塞米松处理24小时的小梁细胞内RhoGDI分子表达的变化趋势。
结 果
成功体外培养永生化人眼小梁细胞株，显微镜下地塞米松处理的小梁细胞形态与对照组相比并无明显变化。MTT比色法绘制小梁细胞生长曲线结果显示，10-6M和10-7M地塞米松处理2-3天抑制细胞生长增殖，前者抑制作用更明显。免疫印记法结果显示小梁细胞内有RhoGDI和RhoA蛋白分子表达，地塞米松处理组的细胞与对照组相比RhoGDI分子表达减少，RhoA分子表达增加。各种浓度地塞米松均抑制细胞内RhoGDI分子表达，浓度越高抑制作用越强。免疫细胞化学法结果显示小梁细胞RhoGDI分子表达阳性，地塞米松处理的细胞表达减少。
结 论
地塞米松抑制人眼小梁细胞的生长增殖活力。小梁细胞内有RhoGDI蛋白和RhoA蛋白分子表达，地塞米松能够下调RhoGDI蛋白的表达，同时上调RhoA蛋白的表达，前一种作用随浓度增高呈现增强趋势。小梁细胞内Rho GTP酶及其调节蛋白的变化可能参与调节小梁细胞的收缩状态以及原发性开角型青光眼的发病过程，但其间的确切机制，尚有待进一步研究。 |
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| 会议投稿录入：sophia100 责任编辑：毛进 |
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