阳离子聚合物介导的外源基因对体外培养的兔角膜内皮细胞生长影响的研究

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阳离子聚合物介导的外源基因对体外培养的兔角膜内皮细胞生长影响的研究

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阳离子聚合物介导的外源基因对体外培养的兔角膜内皮细胞生长影响的研究

作者：张林 … 文章来源：陕西省西安交通大学第一附属医院眼科 710067 点击数：1015 更新时间：2007/6/5 16:41:26

研究目的：观察人端粒酶逆转录酶（human telomerase reverse transcriptase，hTERT）对体外培养的兔角膜内皮细胞（rabbit corneal endothelial cell,RCEC）生长的影响，为探索最佳的体外促角膜内皮细胞（corneal endothelial cell，CEC）增殖因素及永生化CEC的制备奠定实验及理论基础。研究方法： 1. 用揭膜+消化法进行RCEC的体外原代培养。 2. 用神经特异性烯醇化酶（NSE）鉴定培养的RCEC。 3. 阳离子聚合物 SofastTM介导pCI-neo-hTERT质粒转染体外培养RCEC。 4 G418筛选阳性克隆。 5. 对筛选出的hTERT+-RCEC进行传代培养，观察细胞生长变化情况。 6. 超微量ATP酶测试盒测定hTERT+-RCEC的 Na+-K+-ATPase活性，血细胞计数板进行细胞计数。 7. 统计学处理：用SPSS13.0软件，统计数据用 ±S表示，采用重复测量法和方差分析中最小显著法(LSD)进行统计学分析。结果： 1. 成功实现RCEC的体外原代及传代培养。 2. 培养细胞经NSE染色、苏木素复染后，呈NSE阳性表达。 3. hTERT转染后早期细胞多呈梭形或多角形，与原代细胞相似，但折光性明显增强，保持单层生长。 4. 从生长曲线看hTERT+RCEC比原代细胞的增殖速度快，相同生长时间比后者细胞数量多，更容易达到细胞融合，并仍保持接触抑制。 5. hTERT+RCEC比原代细胞贴壁时间短，接种率更高。结论： 1. hTERT+RCEC形态与原代培养RCEC形态相似，转染后早期RCEC多呈梭形或多角形，逐渐伸展呈非典型的六角形形态，保持单层生长，并出现接触抑制，其增殖速度和贴壁能力明显高于原代培养RCEC。 2. 外源基因hTERT可有效促进RCEC分裂增殖，为进一步研究CEC增殖能力奠定了基础。

会议投稿录入：aya610 责任编辑：毛进

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