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| 细菌内毒素及激素对角膜上皮细胞Toll样受体表达影响的实验研究 |
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作者：秦勤 晋秀… 文章来源：浙江省温州市学院西路270号 温州医学院附属眼视光医院 325027 点击数：1087 更新时间：2007/6/6 10:59:06 
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| 目的：革兰氏阴性菌是导致人眼细菌性角膜炎的重要原因之一。本研究通过研究人角膜上皮细胞系(HCEC)在接受革兰氏阴性菌胞壁的组成成分—细菌内毒素(LPS)的刺激后Toll样受体(toll-like receptors,TLRs)的表达和功能变化，以及在此基础上加上糖皮质激素调控后TLRs的表达和功能变化，探讨TLRs在角膜细菌感染中的作用。
方法：首先通过RT-PCR及quantitative Real-Time PCR检测培养的HCEC中TLR1-10的表达情况；然后在HCEC培养液中加入三种浓度的LPS（1，10，100ng/ml）共培养48小时，通过quantitative Real-Time PCR检测此时TLR1-10的表达情况；以及在此基础上，根据上一步的结果，选择在10ng/mlLPS刺激的HCEC培养液中加入三种浓度的氢化可的松（1，10，100ug/ml）干预后，通过quantitative Real-Time PCR检测此种情况下TLR1-10的表达情况。再用ELISA来检测以上三种情况下培养液中化学因子IL-6，IL-8的释放情况。并且通过免疫荧光组化来检测TLR2，TLR4在蛋白水平的表达。
结果：TLR1-10在HCEC均有表达，且各TLR表达量不同。LPS能增加HCEC的TLRsmRNA的表达，且LPS为10ng/ml时其表达量最高；同时IL-6、IL-8的释放也相应增高。在10ng/mlLPS刺激的HCEC培养液中加入氢化可的松干预后，随着激素浓度的增加，TLRs的表达也随之增加，此时IL-6的释放下降，而IL-8的释放增加了。免疫荧光组化也显示了三种情况下HCEC胞内均有荧光表达，且强度不同，趋势与mRNA水平的表达一致。
结论：角膜上皮细胞除自身的屏障作用外，其表达的TLRs与角膜抵御细菌的天然免疫密切相关；角膜上皮的天然免疫受体TLR2，4可能在角膜上皮防御细菌感染的过程中发挥着重要作用；在本研究中我们有个关于糖皮质激素机制的新发现，即在细菌侵袭角膜的早期，糖皮质激素可能增加角膜的免疫，其通过增加角膜上皮TLRs的表达而使角膜上皮对细菌的侵袭具有一定的防御作用。研究结果对理解细菌在角膜的感染机制和进一步研究细菌性角膜炎的药物治疗提供一定的理论依据。
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| 会议投稿录入：aya610 责任编辑：毛进 |
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